380bp程度の増幅物が生成されるはずのPCRをやっていますが、同じ条件でやってもバンドが薄くなったり、きれいに出たりと安定しません。最近は回を重ねるごとにバンドがどんどん薄くなっていくような気がします。
ラボの経験豊かな助手さんは、経験上、ずっと部屋にこもって実験をしていると部屋が汚染されていることによるコンタミがあるかもしれないから、空気を入れ替えたり白衣を変えたりした方が良い、といいます。私が以前いたラボよりもサンプルを混和する部屋が狭いのは確かですが、今までそんな提案をされたことはなく、そもそもそれが決定的な原因だとは信じがたいです。
サンプルのDNA(血液からキットで抽出)の劣化の可能性はありますが、それ以外でこのように不安定になる理由は何がかんがられますでしょうか。
プライマーはすでに先輩がデザインして、うまく機能することが分かっていますが、これも劣化している可能性は否定できません。アニーリングは54度、MgClは試行錯誤の結果、2.0mMでやっています。HotStartで、サイクラーの設定は95度10分、95度30秒・54度30秒・72度30秒を35サイクル、72度で7分、4度で保存、としています。
あわせて、皆様がこのようなトラブルや汚染を防ぐために心がけているコツのようなものがありましたら、当たり前のことでも、お教えください。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
似たような質問が見つかりました
- その他(病気・怪我・症状) 抗原検査で2回陰性 咳があったので PCR検査依頼中 要請になる確率はどれぐらい 3 2022/05/28 06:33
- 物理学 特殊相対性理論を、完全否定に成功~ガンマの数式は、成立しない。 2 2023/03/08 19:30
- 婦人科の病気・生理 前戯のみで生理が来ません。挿入経験なし処女です。 冷やかし等は御遠慮ください。 4月最終日に彼氏に初 4 2023/05/15 01:59
- 政治 震度7もありえる場所に使用済み核燃料の中間貯蔵施設を作るそうですが、舐めてるのですか? 5 2023/08/07 12:43
- ウォーキング・ランニング ジョギング 2 2022/11/05 09:47
- Bluetooth・テザリング iPhone12mini グレーアウト 1 2023/04/09 20:10
- 病院・検査 長文です。ドクターショッピング? これはドクターショッピングにあたりますか? また、新しい病院を受診 6 2023/01/27 10:24
- その他(社会科学) 階級制度が必要だと本気で思っています。 12 2023/06/26 02:14
- 転職 内定相談になります。 前提条件として、自分は転職回数が複数回すでにあります。 条件変更は以下になりま 3 2023/02/13 08:00
- 簿記検定・漢字検定・秘書検定 簿記一級を取るべきかわからず困っています。 簿記一級とその他学外活動の各コストパフォーマンス(費用対 3 2022/08/21 20:16
おすすめ情報
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
PCRとシークエンス反応
-
PCR組成とDNAのスメア
-
PCRでバンドが2,3本出てしまい...
-
RAPDマーカーって何ですか?
-
DNAを室温で放置してしまい、DN...
-
PCRで複数のバンドがでます。
-
PCRの失敗について
-
PCRでDNAが増幅されないのは・・
-
mRNA発現量を求める実験法
-
GCリッチなプライマーを使用し...
-
PCR法の原理
-
PCRの最初の熱変性と最後の伸長...
-
PCRに関する計算
-
プライマーの劣化凍結融解について
-
pcr,アガロースゲル電気泳動に...
-
アニーリングの温度設定について
-
エキストラバンドがでる理由
-
DNAの塩基配列を決定するシーケ...
-
真核生物のラギング鎖合成
-
ただしいデカントの方法
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
PCRで複数のバンドがでます。
-
PCRとシークエンス反応
-
エキストラバンドがでる理由
-
PCRの失敗について
-
PCRでバンドが2,3本出てしまい...
-
プライマーの劣化凍結融解について
-
PCR組成とDNAのスメア
-
突然PCRがうまくいかなくなりま...
-
プライマーダイマーが出てしま...
-
定量性に欠けると言われるはな...
-
DNAを室温で放置してしまい、DN...
-
定量PCRのスタンダード作製
-
rep-PCRって?
-
DNA断片分析のPCR法で使うMaste...
-
PCR、プライマーとDNA複製について
-
質問です!
-
PCRでの分子量の見極め
-
プラスミドへのインサート長が...
-
転写反応には、どうしてプライ...
-
D-loopについて
おすすめ情報