遠心分離をする際に、7000×g・10分間、105000×g・60分間などというような記述がありますが、遠心機の回転数はどのように決めているのでしょうか。
分離遠心法の場合、沈降係数(S値)の違いで成分を分けています。遠心にかける時間は沈降係数(S値)とKファクター(K値)で決まってきて、沈降時間=S/Kです。KファクターはN(遠心機の回転数rpm)の関数で、遠心機の回転数が大きいほど沈降時間は短くなります。
私は、回転数は遠心機の最大回転数にすれば、沈降時間が短くなり、実験が早く終わるので、常に最大回転数にすれば良いのではないかと思うのですが、何故回転数を変えて遠心機にかけているのでしょうか。
回転数が高すぎると、細胞構造が破壊されるからといったような問題があるのでしょうか。もし、そうでしたら、目安みたいな回転数はどここかで参照できないでしょうか。たとえば、何回転以上に設定するとタンパク質が壊れる、何回転以上に設定するとグリコーゲンが破壊される、何回転以上させると細胞内小器官が破壊される・・・などです。
文章が長くなりましたが、ご存じの方いらっしゃいましたらお教えください。よろしくおねがいいたします。
A 回答 (5件)
- 最新から表示
- 回答順に表示
No.5
- 回答日時:
問題の本質部分については解答が出揃っていると思います。
それ以外の部分について、、、。
回転数を大きくすると生じる問題
1、チューブの限界耐圧を超えて、チューブが割れてしまう。
2、回転にはぶれがあります。特に回転初期の場合に気をつける必要があります。
ぎりぎりで設定すると排除したいものも沈殿する可能性が高くなります。
3、得られたペレットが硬すぎて、次の実験に使えない。
次の段階で再溶解させる必要がタンパクの実験の場合多いと思われます。
単に実験を円滑に進めるためで、本質部分には触れていませんが、
こういった作業性に関することはプロトコルの中で大きな位置を占める場合が多いです。
ご参考までに。
No.4
- 回答日時:
沈降係数の式をどこかで見つけられませんか?
沈降係数を大きく左右するのは沈降させたいものの半径です。
生体試料だと希釈率によって溶液の比重、粘性が変わってくるのでこれも影響します。さらにショ糖などをくわえて積極的に比重を上げてやるとその比重より大きいもの以外は浮いてしまいます。これを利用した密度勾配遠心法もあります。
ブラウン運動により、ある程度以下の分子サイズのものは静置してもいつまでも沈殿しません。なので、小さいGで長時間、例えば理論値の時間遠心しても目的のものが沈殿するとは限りません。
沈殿を回収したい時、沈殿がどの程度硬いかによって操作が変わります。硬い沈殿ならデカントで上精を除くことが出来ますが、やわらかい場合はピペットなどで静かに除きます。このペレットの硬さは時間よりはGによって調整するものですが、理論値はあまりないでしょうね。沈降するかどうかは結構理論計算できますよ。
細胞は確かにGを掛けすぎると死にますね。ただ、壊れるという表現はもう少し慎重に使った方がいいと思います。細胞が沈殿した後、強いGが掛かれば細胞の中で細胞内小器官が偏ったりして壊れる部分があるでしょう。グリコーゲンだと、どんな力が掛かると壊れるか?遠心では壊れないような気がします。
No.3
- 回答日時:
細胞やタンパク質等にしてもその種類によって影響が大きく異なると思いますし、溶媒、夾雑物の種類や量、ローターの形状(アングルローターとかスイングローターとか)、チューブの材質や形状、温度、目的とする純度や収率等、多数の要因が影響するので、なかなか一般化した基準というのは作りにくいのではないでしょうか。
大抵のプロトコルでは遠心分離をする必要がある場合には必ず回転数(またはg)や時間の記載があるので、まずそれを試してみてうまく行かない場合は条件を再検討してみてはいかがでしょうか。細胞が死んだ場合やペレットが再懸濁できないほど固まった場合は回転数を落とす、沈殿が緩すぎる場合には回転数を揚げる、等々。
類似した目的のプロトコルを複数参照すれば、最初に試みるべき条件のイメージはだいたい浮かんでくると思います。
やはり理論だけでは明確に分からないものなのでしょうか。
類似したプロトコルを参照しながら、アタリをつけて
回転数と時間を決めていかなければならないのですね。
なにか、物質ごとに回転数と遠心時間がまとまったグラフや表みたい
なのがあれば便利なのですが、そういったものはあるのでしょうか。
No.2
- 回答日時:
基本的なことを理解しているようですので、もう少し調べれば分かるんじゃないかと思います。
逆に考えてみてください。遠心ではなく静置で、時間さえ掛ければすべてのものが沈降するのでしょうか?
少し発展させて、105000xg60分で沈殿させたものを、例えば20000xgで理論値の時間回すと同じように沈殿するでしょうか?
この回答への補足
確かに、
105000×g60分で沈殿させたものを、20000×gで理論時間回すのでは、
105000×gで回す方が、試料へのダメージが大きそうな気がします。
資料へのダメージと回転数のバランスが重要ではないかという気が
してきます。
ダメージと回転数の目安というのは何かあるのでしょうか。
明確なものでなくても、タンパク質なら何回転以上させては
いけない、糖なら何回転させてはいけない、といったような
感じのものです。
No.1
- 回答日時:
何の遠心分離で(細胞?タンパク質)、どのような溶液中の、何を分離するための条件を想定して、おっしゃっているのでしょうか?
なんの場合でも、ためしにMAXスピードでやってみたことありますか?
学校の実習でやった実験なので、指示書に書いてある手順通りに
遠心機をまわしただけですので、ためしにMAXスピードでやってみたことはありません。
実習では、ラットの肝臓からグリコーゲンを分離するような実験を行いました。
やはり回転数というのは、ためしにやってみて適した回転数を見つけるという地道な作業が必要なものなのでしょうか。
説明不足でした。すみません。回答よろしくお願いいたします。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
似たような質問が見つかりました
- その他(自然科学) 風車音の測定 3 2023/04/28 07:12
- 物理学 フィゾーの実験に関する問題。 歯車と反射鏡の間の距離L=3 km、波数N=1000とする。単位時間当 2 2022/11/21 19:45
- その他(コンピューター・テクノロジー) 50台の織機から回転数を取得・集計しモニターに表示したい 2 2022/11/05 15:48
- パチンコ・スロット 【パチンコの遊タイム(b時短)の意味を教えてください】 パチンコの遊タイム(b時短)の発動条件は1/ 3 2022/04/03 13:49
- タクシー タクシーの運賃ってなぜJRのような大都市近郊区間のような最短経路の運賃計算にしないのですか? 実際の 7 2023/06/27 11:30
- 物理学 2種類の風切り音の周波数の違い 1 2023/04/20 07:39
- 転職 転職経験のある方に質問です。 4 2022/05/13 03:24
- 環境学・エコロジー ばい煙測定における試料採取回数について 1 2023/02/02 16:25
- 自転車保険 【労務事務】従業員の通勤経路について 5 2022/10/06 09:34
- 国産バイク スクーターがすぐにエンストしますが、スタンドを立てると回転数が急上昇します。 9 2022/07/14 23:45
このQ&Aを見た人はこんなQ&Aも見ています
-
外出時に「待たせる妻」vs イライラする「待つ夫」は日本だけ?見習いたい海外事情
夫の家事参加に積極的なイメージのある海外でも、同様の事例はあるのか。結婚カウンセラーの佐竹悦子さんに伺ってみた。
-
rpmをgに変換する方法(遠心分離機)
その他(自然科学)
-
遠心分離の回転数について
化学
-
血液が血漿と細胞にわかれる最小の加速度は?
生物学
-
-
4
BSA溶液の作り方。
生物学
-
5
オートクレーブで水を滅菌したいのですが・・
化学
-
6
遠心分離の条件について
生物学
-
7
細胞の遠心分離について
生物学
-
8
吸光度、OD数について
化学
-
9
1mol/L塩酸の作成方法(確認)
化学
-
10
生菌数の換算・・・/mlと/gについて
生物学
-
11
略語がわからない
生物学
-
12
オートクレーブ121℃15分の意味
生物学
-
13
エタノール沈殿での70%エタノールと100%エタノールの使い分け
生物学
-
14
遠心分離機の時間
医療
-
15
DNAの保存温度
生物学
-
16
HPLCカラムの洗浄方法
化学
-
17
糖の定量について
化学
-
18
脱イオン水、MilliQ、蒸留水 の違いを教えて下さい
生物学
-
19
pKa のリストを探してます
化学
-
20
pHメーターのKClを入れる穴はなぜ開けておかないと行けないのですか?
化学
おすすめ情報
このQ&Aを見た人がよく見るQ&A
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
mock細胞とは?
-
BSA溶液の作り方。
-
なぜIL-1とIL-6とTNF-αが主流...
-
パーセンテージで得られた結果...
-
遠心分離の際の回転数の決め方
-
ヒトが飲食できる最高の温度は?
-
G418の濃度(セレクション)
-
RAW264.7マクロファージについて
-
DEPC処理水とRNase free水 違...
-
細胞膜の選択透過性と半透性の...
-
疑問に思ったことがあるんです...
-
MTTアッセイとMTSアッセイの違い
-
どのくらいの期間で、細胞は、...
-
細胞塊をバラバラにしたい
-
細胞の増殖曲線、doubling time...
-
細胞っていくつくらいの原子か...
-
生物の参考書の細胞の章を読ん...
-
食べて増えた700グラムはどんく...
-
細胞培養中の長時間停電
-
FBSの保存温度について
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
BSA溶液の作り方。
-
mock細胞とは?
-
Image Jでの細胞面積の測定につ...
-
遠心分離の際の回転数の決め方
-
パーセンテージで得られた結果...
-
細胞膜の選択透過性と半透性の...
-
グリセロールストックについて?
-
FBSの保存温度について
-
RAW264.7マクロファージについて
-
ヒトが飲食できる最高の温度は?
-
骨組織と軟骨組織の構造上の違...
-
膨圧と浸透圧の違い
-
なぜIL-1とIL-6とTNF-αが主流...
-
G418の濃度(セレクション)
-
木はどこがどのように成長する...
-
肺の細胞 入れ替わり
-
Cell LineとPrimary Cellの違い
-
予定運命と発生運命の違いは?
-
細胞っていくつくらいの原子か...
-
線維化とは
おすすめ情報