No.2
- 回答日時:
そういえば,この件のG-sepharoseは,Protein G-sepharoseじゃなくて,GST-sepharoseでしたね.失礼しました.IgGのことは忘れてください.
確かに,GST融合タンパク質同士,あるいは大腸菌内の別のタンパク質を介したGST融合タンパク質同士の会合がひとつの可能性として考えられます.もしも,GST融合タンパク質が多量体を(n>=2)形成する性質を本来持っている場合は,回避しようがないかもしれません.
決め手となる対処法があるかどうかは分かりませんが,まずは,G-sepharoseにGST融合タンパク質を保持させるときの溶液条件において,塩濃度を上げる,そしてTriton-Xなどの界面活性剤を少し加える,といったことは,もう試していますよね?特に,添加する塩としてNaClがあまり効かなかった場合,KIあたりを使ってみるのも一案です(> 0.1 M).でも,KIが濃すぎると,目的のタンパク質が失活するかもしれないので,程々に.
参考URL:http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp00919.ns …
No.1
- 回答日時:
精製の目的のタンパク質はIgG?それともIgGの抗原でしょうか?
もしも、目的のタンパク質が抗原で、しかも使っているIgGがポリクロだとしたら、現象を説明できるかもしれません。すなわち、ポリクロの場合、エピトープの異なる抗体が多数あることが考えられますので、抗原タンパク質に複数のIgGが結合し、それによって、G-sepharose同士が抗原タンパク質を介して次々に架橋されてしまう、そしてさらにはゲルがダマになる、ということがあるかもしれません。
しかし、精製するタンパク質がIgGだったり、あるいはそうでなくて抗原であっても使っているIgGがモノクロだったら、やっぱり何が起こっているのか、分かりませんねぇ。これらの場合、案がありません。
この回答への補足
大腸菌で発現させたGSTタグ付きタンパクをG-sephaで精製しているだけなので、
特定のIgGは入っていないはずなのですが…
もしかしたら、G-sephaと相互作用しているGST-proteinがアグリゲートなどを起こしているのかもしれない、ということは考えられますか??
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