形質転換（トランスフォーメーション）の手順で「氷上での放置」について

形質転換（トランスフォーメーション）の手順で「氷上での放置」について

連続で形質転換（トランスフォーメーション）の手順の質問をして、申し訳ございません。
トランスフォーメーションで、コンピテントセルとプラスミドDNAを混ぜた後、氷上で30～60分間放置した後、42℃でヒートショックを行っています。
そこで質問なのですが、なぜコンピテントセルとプラスミドDNAを混ぜた後、「氷上で30～60分間放置」するのですか？
両液をピペッティングなどでよく混ぜた後、すぐに42℃でインキュベートしてヒートショックを与えてはいけなのでしょうか？
基本的な手順についてお聞きして申し訳ないのですが、ご存知の方がおられたら、ご教示願えたら幸いです。
よろしくお願いいたします。

No.1 回答者： otx 回答日時： 2010/07/07 17:02

＞なぜコンピテントセルとプラスミドDNAを混ぜた後、「氷上で30～60分間放置」するのですか？

化学的な根拠は詳しくは知りません。
ただ、何となく、
大腸菌とDNAが、ほどよくまざり細胞表面等にDNAがまぶされる必要がある
低温の方が、傷だらけの大腸菌にやさしい、DNAの分解等も防げる
とか、聞いたことがあります。

＞両液をピペッティングなどでよく混ぜた後、

前の質問の回答でも書きましたが、大腸菌は処理されて「ゆるゆる」なので
ピペッティングすると死んだりします。やめた方が良いです。

この回答へのお礼

otxさん
ありがとうございます。
大腸菌の回復などの意味もあるのですね。
それにピペッティングがやめた方がいいのですね。
勉強になりました！
連続でご回答して頂いて、本当にありがとうございました。
これからもいろいろお聴きするかもしれませんが、どうぞよろしくお願いいたします。

お礼日時：2010/07/13 02:47