分子生物学を扱う研究室に配属された新4年生です。

先輩の研究を引き継ぐため、プラスミドベクターを分けてもらいました。

もらったプラスミドベクターの量が少ないため、増やそうと考えているのですが、具体的にどのような実験操作を行えば良いのでしょうか?

基本的な質問だと思うのですが、よろしくお願いします。

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A 回答 (2件)

コンピテントセルという大腸菌に遺伝子を組み込んで、プラスミドに挿入されている薬剤耐性に対する抗生物質を入れた培地で飼って、大腸菌を増やし、プラスミドを精製するだけです。


遺伝子組み込みの方法は大きく分けて、電気と温度の2通りがありますが、これによって使う大腸菌も違います。

この回答への補足

ありがとうございます!!

重ね重ね質問になるのですが…

この作業って形質転換でしょうか?
一晩培養した後は、どのようにして増やしたものをプレートから取り出すのでしょうか?
また、精製はボイルプレップをすればいいのでしょうか?

補足日時:2011/04/22 00:03
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この回答へのお礼

ありがとうございます!!

お礼日時:2011/04/26 19:58

指導の先生に伺うのが良いのではないでしょうか。

この回答への補足

書き込む前に、担当の教授に聞いたら「わかってるよね?」と軽くあしらわれてしまったため質問しました。
よろしくお願いします。

補足日時:2011/04/21 19:10
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Aベストアンサー

 こんにちは。某フリーソフト作者です。
 一言で言えば「趣味」ですね。

 収入源なんてものはないに等しいと思って頂いて結構です。強いて言えばウェブサイトを作ったときの広告収入や雑誌掲載の謝礼として送られてくる掲載誌ぐらいでしょうか。
 私は広告をペタペタ貼るだけムダと思っていて、アマゾンの広告くらいしか貼っておらず、収入0円です。雑誌も今年に入ってからはほとんど掲載されていません。載っても載らなくてもどうでも良い、と思うようになってきましたが…。

 著名ソフトだったら商品化、記事や書籍の執筆etc...して収入を得る方がいらっしゃいますが、ほんの一握りもいないでしょうね。

 むしろ、(1)開発言語の購入やバージョンアップ費用、(2)書籍代、(3)レンタルサーバー代、(4)ウィルスソフトの更新料など出て行くほうが多いです。ちなみに私は無料の言語を使っておりますので、(3)(4)だけですが年間1万数千円の出費になります。

 それでも公開を続けるのは、普段からいろんなフリーソフトにお世話になっているので、自分のソフトも「どこかで役立てればいいな」というボランティア精神からです。
 あとは「おいしくできたから食べてみてね」というようなおすそわけ的な精神もあるでしょうね。(実はこっちのほうが大きいかもしれません…)

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Q研究室配属と進路について☆

理系3年生(女)です。
ずっと分子生物学の研究がしたいと思っていたのですが、
先日、配属決定のくじ引きで外れてしまい、有機化学系の研究室に決まりました。
だいぶ落ち込みましたが、もう決まってしまったことだし、
4年生の1年間を他ジャンルで勉強しても、将来的に自分にとって別に無駄にはならないんじゃないかなぁ、と思い直し(自分に言い聞かせ?)てるところです。

そこでぜひぜひ、院で4年生のときとは全く異なる分野に進んだという方のご意見が聞きたいです。
「4年生時代の卒論研究が、今に生かされてる or むしろプラスになってる」と感じるときってありますか?
なにか素敵なエピソード等ありましたら、教えてください。
前向きなご意見で、背中を押してもらえたら、と思ってここに質問させていただきました。
アドバイス等もぜひぜひよろしくお願いします!
研究者を目指しているので、特に私と同じ女性で、現在現役で研究を頑張ってらっしゃる研究者(大学院生)の方のお話が聞けたらうれしいです。
知人でがんばっていらっしゃる方がいる、というご意見でも大歓迎です☆
だらだら長くなってしまってごめんなさい(>_<)
よろしくお願いします!!

理系3年生(女)です。
ずっと分子生物学の研究がしたいと思っていたのですが、
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「4年生時代の卒論研究が、...続きを読む

Aベストアンサー

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もちろん、自分のやりたいテーマのほうが面白いとは思いますが。

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医師の資格を持ち、さらにそれらを用いながら研究をしたいのでしょうか?それとも将来教科書に載せられるような発見をして学問を追究したいと思っていますか?
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私が学生さんたちにいっているのは、本当にやる気になれば研究はある程度何歳からでもできる。でも、研究をずっと好きでいることはそんなに簡単ではない。なぜなら研究よりもおもしろいことは世の中にたくさんあるから。でも研究よりおもしろいことが他に無いと思っているひともいる。ということです。
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Qベクター画像を作成できるフリーソフト

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ラスターグラフィック系なら#1の回答のように数多ありますが、ベクターグラフィックアプリケーションで、フリーソフト・Illustratorなみの機能のものは無いと思います。
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RGBのみ・有償でいいのなら、ソースネクストのDrawGraphic、CorelのCorelDRAW Essentials2のような比較的低価格なソフトがあります。
商業印刷用のCMYK対応で有償ならIllustratorの他にCanvas、FreeHAND、CorelDRAW GraphicSuite X3があります。

Qプラスミドベクターについて

動物細胞へのベクターの導入原理について、悩んでいます。
「プラスミドは自己増殖能を持つ」という記述があるのですが、
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それとも、核内のDNAに組み込まれて目的タンパクを合成するようになるのでしょうか?
生物の知識はかじった程度で、実験等を進めてきたのですが、
イマイチはっきりとしない箇所が多く、迷っています。
助言を得られたら、非常に幸いです。

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こんにちは。
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 核内のDNA、つまりゲノムに組み込むためには、レトロウィルスベクターを使う必要があります。この方法ではレトロウィルスに目的の遺伝子を組み込んで哺乳類細胞に感染させ、その遺伝子を宿主細胞のゲノムに組み込んでしまいます。もちろん目的の遺伝子からタンパクの発現が得られます。しかし、現実的にはウィルスの感染効率が悪かったり、しばらくするとタンパクの発現が落ち込んでしまったり、といった問題があります。

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ベクターのフリーソフトを手順どうりダウンロードして 解凍ソフトを重ねて
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Aベストアンサー

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QSiRNAとプラスミドベクターとのライゲーション

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そこでライゲーションの方法ですが、普通にT4DNAリガーゼを使ってもできますでしょうか。
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Aベストアンサー

RNAの場合は下に回答がありますので、
siRNAをコードするDNAだった場合について。

もしもオリゴDNAを自分で発注して、
アニールさせてインサートとして入れるのであれば、
通常のオリゴDNAは末端にリン酸基がついていないので、
(注文すれば有料でつけてくれますが)
そのままの状態で、
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アルカリフォスファターゼ処理しないで、
セルフライゲーションが出ないものを用意しておくか、
(スタッファーDNAが入っていないベクターの場合は特に注意が必要です)

インサート側をPNKなどでリン酸化する必要があります。

Qベクターのあるフリーソフトのダウンロード法

訳があって デザインした文字をTシャツに昇華プリント加工する必要に迫られ しかも「立体文字」を
デザインする必要に迫られ ウェブサイトをさまよってると ベクターのフリーソフト「もこもこ」なるサイトに出会いました。
http://www.vector.co.jp/vpack/browse/pickup/pw5/pw005196.html
フリーソフトと分かって 喜びいさんでダウンロード
しようとして うまくダウンロード出来ません。
ウェブ上の「ダウンロード」の項をクリックしても
うまくダウンロード出来ません。
実は ベクターのフリーソフトをダウンロードした
経験ゼロです。ひょっとして 事前の会員登録制?
なのでしょうか。
どなたか 御教示 お待ちしています。
PS。「ラーサプラス」なる解凍ソフトは
   インストール済みです。

Aベストアンサー

最近「Vアップ通知」なるサービスが開始され、ダウンロードを開始する前に、そのサービスの案内ページが挿入されるようになりました。
このページで「登録するとバージョンアップの連絡…」などの文面があるのでそれで迷われたのでしょうか?
案内ページの下にある「いまは登録しない」ボタンを押すととりあえずダウンロードが開始されますよ。

自分も変更直後に「登録が必要になったのか?」と勘違いし少しハマりました(^^;

Qベクターとプラスミドと形質転換

ベクターとプラスミドって何が違うんですか?
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形質転換によってプラスミドはどれくらい増えるものなのですか?

Aベストアンサー

こんばんは。
もう答えは出ておりますので、補足を少しします。

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一つの細胞内(ここでは大腸菌一体の事をさします)。で増えるプラスミドの量はベクター内の複製起点及びそ周辺のDNAシークエンスによって異なります。

pUC、pBR系などの有名なハイコピーベクタープラスミドの複製起点はColE1をアレンジした配列が含まれており、一細胞内で500程度のコピー数になります。

それに反してpACYC系に見られるローコピーベクタープラスミドはp15の様な複製起点が厳密に定義されている物はコピー数が少ないです。
これによって一細胞内でのコピー数は20-30程度です。
この様に考えますとベクターコピー数も収量に大きく関与するファクターと言えます。

No.1さんは恐らくハイコピープラスミドベクターのオーバナイトカルチャーの事をご指摘されているのだと思います。

下らない補足、失礼致しました。


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