RT-PCR法を勉強していて疑問に思ったのですが、
cDNAを増幅した後、mRNAをつくるとき、作られたmRNAはcDNAとハイブリダイズしていると思うのですが、そのハイブリダイズしているcDNAはもう鋳型として使われることはないのですか?それとも一本鎖になって、またmRNAを作るための鋳型として使われるのでしょうか?

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A 回答 (3件)

RT-PCRとは「reverse transcriptionでmRNAからcDNAを作り,このcDNAをテンプレートにしてPCRを行う」方法を指します.2つの反応は別々に行うのです.RT反応でテンプレートとなるmRNAは組織,細胞株などから抽出したものを用います.ですから,通常「mRNAをつくること」はありません.



遺伝子の発現の有無や量をmRNAレベルで調べるときやタンパクをバクテリアなどの系で発現させたいときなどにこの方法を使います.
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この回答へのお礼

やっぱりそうだっだのか、、、。
 インターネットで少し調べたとき、「RT-PCR法によるmRNAの検出」と書いてあるものがおおかったので、かってにmRNAを作ることが最終目的だと思い込んでいました、、、。
 とても勉強になりました。どうもありがとうございます。

お礼日時:2001/07/02 18:06

若干誤解があるかもしれませんね。


生物の体内でゲノムDNAから転写されてできるのがmRNA。
このmRNAを逆転写(RT)してできるのがcDNA。
普通、PCRでcDNAを増幅してもmRNAにはなりません。
増幅されたものはcDNAです。
ちなみに2本鎖のcDNAはどちらも鋳型になります。
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この回答へのお礼

勘違いしていることが解決いたしました。
 mRNAを作るところも反応に含まれていると思い込んでいましたが、
違うのですね。PCR法については、理解できたのですが、RT-PCRはどこを調べていいのかわからなくて、、、。
 でも疑問が解決してよかったです。ありがとうございました。

お礼日時:2001/07/02 18:12

>cDNAを増幅した後、mRNAをつくる


というのはどの段階のことですか?

RT-PCR法は

抽出RNA
 ↓ RT(逆転写反応)
cDNA
 ↓ PCR
PCR product

のような流れですが.

それともこの前,もしくは後にin vitroでmRNAをつくらせるということですか?

この回答への補足

>cDNA
   ↓ PCR
 PCR product
の段階でmRNAが作られると私は解釈していたので、この段階のことをさしているのですが、、、。
>抽出RNA
  ↓ RT
 cDNA  の段階でもできるのでしょうか?
まだ、勉強したてなもので、間違った解釈をしているのかもしれません。
もしよろしければ、そこのところも教えてください。 

補足日時:2001/07/01 01:24
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しかし、こういう川柳が毎年発表されているのを見ると、
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そんなに単純じゃないと思います。

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あのう、キットの名前ですが、
SuperScript First-Standard Synthesis System for PCR
ではなくて
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それならば、キットの取説はダウンロードできます。
http://www.uccs.edu/~rmelamed/Lab/Protocols/Superscript%20Protocol.cfm.pdf

さらに、その取説の6ページ目には
どういう作業を行うか図があります。

そもそも、理解としては、一本鎖でも二本鎖でもcDNAと呼びます、

が、

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あのう、キットの名前ですが、
SuperScript First-Standard Synthesis System for PCR
ではなくて
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Standardではなく、Strandでは?

それならば、キットの取説はダウンロードできます。
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よろしくお願いします。

Aベストアンサー

ある意味, 言葉の定義から明らかだよね. だって, 転写される (つまりプロダクトとしての RNA に相補的な) ものを「鋳型鎖」っていうんだから.


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