現在、実験でアガロースゲルを用いて電気泳動を行なっています。
しかし、ポジティブコントロールは毎回バンドがでるのですが、目的とするバンドの方は、帯状にPCR産物が流れた跡のようなものが出るのみで、バンドが出なくなってしまいました。
1ヶ月くらい前まではきちんとバンドが出ていたので、プライマーの設計ミスでもなさそうなのですが、何が原因なのか分からず困っています。
PCRをかける前のDNAは10ng/μLで、実際電気泳動で流しているDNA濃度は測定していないため、分かりません。
ちなみに電気泳動の条件は以下のとおりです。
・ゲル:1.5%アガロースゲル
・電圧:100V
どなたか知恵を貸してください。
実際の電気泳動後の写真は、
http://oshietegoopcrdenkieidou.rakurakuhp.net/
に載せました。
よろしくお願いします。
A 回答 (1件)
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No.1
- 回答日時:
写真見ましたが、すごいスメアーですね。
どのくらい、お力になれるかわかりませんが、もう少し条件を詳しくお願いします。ポジコンとサンプルで違っているのはテンプレートとプライマーですか?
>1ヶ月くらい前まではきちんとバンドが出ていた
バンドが出ていたというのは、何回くらい実験が行われたのですか? その時と現在で何が同じで何が違っているのですか? “1か月前まで正常だったから“にとらわれるのも良くないですけど、とりあえず違っているところを洗い出しましょう。
>PCRをかける前のDNAは
PCRしているDNAはどういうものですか? それに問題はないのですか?
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