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外来の遺伝子の発現を調べるのに、遺伝子につけたHAやFLAGなどのタグを含むプローブというのは使えますか?
内在の遺伝子と区別したい場合、普通は配列の違う別の種の遺伝子を使って、in situ ハイブリダイゼーションをするのでしょうか?

A 回答 (2件)

マウスの事情はよく知らないのですが、、、


私の取り扱っている材料では、ホールマウントで、ISHも抗体染色もごく普通にやられています(マウスに比べればすっと小さいですが)。
実際のところ、核酸プローブの方が浸透しにくいです。ISHでは、プローブの浸透性をよくするため、標本の前処理(プロテアーゼ、界面活性剤、DMSOなど)は不可欠で、プローブの鎖長も長くなりすぎないように調整したりします。抗体染色では、そういうこといっさいなしです(まあ、あれば、Fabフラグメントのほうがいいかなあ、くらいです)。
おそらく、マウスでもホールマウントISHの検出は酵素標識抗体を使うと思うのですが、同じことではないでしょうか。
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この回答へのお礼

そういえば、ISHも抗体を使うんですね。
マウスの胚なのでホールマウントもできるかもしれないです。
詳しい回答どうもありがとうございました。

お礼日時:2005/04/29 10:25

HA-tagやFLAG-tagは、塩基配列にして数十bpしかないので、ハイブリで検出するのは難しいと思います。


せっかくエピトープタグがついているのだから、抗体染色でタンパク質を検出する方が、リーズナブルだと思いますが。
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この回答へのお礼

早速の回答、どうもありがとうございました。

また質問になってしまうのですが、抗体染色は小さい組織だけでなく、マウスの胚全体を見ることもできるのでしょうか?
マウスの胚のin situは多く見るのに、抗体染色はあまり見ないので。
抗体だとあまり浸透しないとか、費用の問題でしょうか。

お礼日時:2005/04/28 13:20

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