大腸菌のグリセロールストックの作り方

大腸菌のグリセロールストックの作り方

学生です。大腸菌のグリセロールストックを以下の方法で作ろうと思っています。

１.大腸菌を一晩震盪培養
２.菌数が1×10^8/ml　になったのを確認して、グリセロールが終濃度15％くらいになるように加える
３.液体窒素で瞬間凍結し、ー70℃保存

２.の菌数が1×10^8/ml になったのを、どのように確認すればいいのでしょうか？吸光度で判断すればいいのかなと思いましたが、どれくらいの吸光度であればいいのかがよく分かりません。
教えてください。よろしくお願いします。

No.2 ベストアンサー 回答者： geneticist12 回答日時： 2008/06/03 16:15

文献により、あるいは大腸菌の系統により、バリエーションがあるとおもいますが、一般的にいわれているのは（そして私が暗記して普段使っているのは）、A600=1で8x10^8 cells/mLだとおもいます。

>２.の菌数が1×10^8/ml になったのを、どのように確認すればいいのでしょうか

グリセロールストックを作るのに菌数を合わせる必要はなく、over-night cultureで十分に殖やした培養液を使えばいいです。それくらい培養すると、プラトー（それ以上菌数が殖えない状態）に達していて、A600=2～3くらいになると思います。

この回答へのお礼

一晩培養し、既にA600=2くらいに達していますので、グリセロールストックを作ってみます。
ありがとうございました！

お礼日時：2008/06/03 17:00

No.1 回答者： nonnon1190 回答日時： 2008/06/03 15:01

その辺にいくらでもあるプロトコールでは

むしろ、

吸光度で～になるように培養

とあると思いますが。

学生さん、どういう環境でストックを作ろうとしていらっしゃるのですか？
どうして指導教官や先輩に聞かないのか？

不思議でなりません。

この回答へのお礼

ご回答ありがとうございます。
指導してくださっている先輩からいただいたプロトコールには書かれていなかった上に、先輩も分からないとのことで。それで、ネット等を使ってプロトコールを探している（吸光度が具体的に書いてあるような）つもりなのですが、、、力不足なのだと思います。もう少し調べてみます。
ありがとうございました。

お礼日時：2008/06/03 15:35