No.3ベストアンサー
- 回答日時:
解凍法については,何の根拠も私は持っているわけではありませんが,室温でしばらく放置して,固相がある程度小さくなったところで穏やかに揺すって全解凍し,ただちに氷に立てています.氷上解凍では,なかなか融けてくれず,結局しびれを切らして,体温でぬくもって解凍したことがあったかもしれません.
用途にも依りますが,私の場合は,解凍Gアクチンをすぐに重合し,そのまま使うことが多いです.また,知人は(アクチンの重合過程をモニターしていました),Gアクチンの解凍後,高速・短時間の超遠心に掛けて,その上清を回収して実験に使っていました.
miico-hさんがどういう実験を予定しているのか分かりませんが,実験内容からの要請を考慮し,実際に試行して得た結果を基にフィードバックして,プロトコルをチューンアップする必要があるかもしれないなあ,と思っているところです.
No.2
- 回答日時:
アクチンの凍結に際しては,精製したGアクチンをそのまま凍結へ回すことが多いので,通常おおむね2-4mg/mlくらいです.そんな程度なので,「濃度を考慮する」という程には気にしていません.
凍結の際,クライオチューブを予め液体窒素で冷やした上で,少量の蛋白質溶液を注入して凍結してください.
この回答への補足
なるほど。凍結の仕方は分かりました。
その、ストックを解凍するときは流水解凍ですか、それとも
氷上解凍ですか?
また、解凍する時に不溶化してしまうなど、何か注意する点などあれば
教えていただきたいのですが・・・
No.1
- 回答日時:
わたしのところで実績のある方法は,Gアクチンを液体窒素で瞬間凍結し,液体窒素保存容器の気相中で保存するものです.ただし,瞬間凍結できるよう,Gアクチンは0.1mL/tube以下で分注しています.試しに1mL/tubeで凍結したら,解凍アクチンはあまりうまく重合しませんでした.
推測ではありますが,良い状態で凍結したGアクチンならば,しばらく(数日?数週間?分かりません)ならば-80℃で保存しても,それほど活性は落ちないような気がしますが,私は試したことがありません.
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