現在、心臓のアクチニン、線維芽細胞に特異的なタンパクであるα-actinin、DDR2を蛍光染色しているのですが、DDR2が全く染まりません。プロトコルは以下のような感じです。
・パラホルムアルデヒド固定
・wash out×3
・0.01% Triton-X 30分
・wash out×3
・1%ヤギ血清30分
・wash out×3
・1次抗体室温一晩
・37℃で1時間
・wash out×3
・2次抗体(Alexa532(actinin),Alexa405(DDR2))3時間(1時間だとactininも染まりません)
・wash out×3
・観察
顕微鏡のフィルタはAlexa532のほうがWIG、Alexa405のほうがWUを使用しております。(ほかにはNUA,IBFLがあります)
actininの方はきれいにサルコメアまで見えているのでが、DDR2の方はどうやっても見えません。2次抗体の選択を誤ったのでしょうか?
長くなって申し訳ありません。
よろしくお願いいたします。
A 回答 (1件)
- 最新から表示
- 回答順に表示
No.1
- 回答日時:
DDR2もAlexa405も使ったことがありませんが、
もし、市販されている抗DDR2抗体が一種類でないのでしたら、
メーカー名や希釈倍率なども示した方がいいのではないでしょうか
二次抗体も同様です
使っている抗DDR2抗体はIHCに使えるものですか?
WBでは検出できるのですか?
ブロッキングにヤギ血清のみを使っているということは、抗actinin抗体もヤギのものでしょうか
それならば、532でDDR2を検出してみてはいかがでしょうか、一次抗体に問題があるのかがわかります
また、actininを405で検出してみれば405に問題があるのかが分かると思います
もし、actininとDDRのホストが別でも、他の抗体でチェック出来ないのでしょうか
抗体で問題がある場合は一次抗体側に問題がある場合が多いと思います
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
おすすめ情報
- ・漫画をレンタルでお得に読める!
- ・街中で見かけて「グッときた人」の思い出
- ・「一気に最後まで読んだ」本、教えて下さい!
- ・幼稚園時代「何組」でしたか?
- ・激凹みから立ち直る方法
- ・1つだけ過去を変えられるとしたら?
- ・【あるあるbot連動企画】あるあるbotに投稿したけど採用されなかったあるある募集
- ・【あるあるbot連動企画】フォロワー20万人のアカウントであなたのあるあるを披露してみませんか?
- ・映画のエンドロール観る派?観ない派?
- ・海外旅行から帰ってきたら、まず何を食べる?
- ・誕生日にもらった意外なもの
- ・天使と悪魔選手権
- ・ちょっと先の未来クイズ第2問
- ・【大喜利】【投稿~9/7】 ロボットの住む世界で流行ってる罰ゲームとは?
- ・推しミネラルウォーターはありますか?
- ・都道府県穴埋めゲーム
- ・この人頭いいなと思ったエピソード
- ・準・究極の選択
- ・ゆるやかでぃべーと タイムマシンを破壊すべきか。
- ・歩いた自慢大会
- ・許せない心理テスト
- ・字面がカッコいい英単語
- ・これ何て呼びますか Part2
- ・人生で一番思い出に残ってる靴
- ・ゆるやかでぃべーと すべての高校生はアルバイトをするべきだ。
- ・初めて自分の家と他人の家が違う、と意識した時
- ・単二電池
- ・チョコミントアイス
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
IBとWBの違いは?
-
血液中には何に対する抗体が多...
-
pan-カドヘリンとは?
-
蛍光顕微鏡について教えて下さい。
-
抗ヒトの二次抗体??
-
ウェスタンブロットのサンプル...
-
mRNAと加熱の問題
-
O型の血液型が生物学的に最も...
-
抗体ストリップ用バッファーに...
-
5~10種類の抗体を少量ずつ...
-
FCMのブロッキング抗体、コント...
-
フローサイトメトリーのネガテ...
-
免疫系による特異抗体の産生
-
バルク溶液
-
ピペットチップ オートクレー...
-
トランスフェクションでの培地...
-
ヨーグルトは腐らないって本当...
-
オートクレーブ121℃15分の意味
-
水にハイターを混ぜると腐らな...
-
染色について
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
おすすめ情報