A 回答 (3件)
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No.3
- 回答日時:
染色・バイオイメージング実験ハンドブック(羊土社)によると、
「蛍光標識二次抗体液、蛍光試薬などでは、蛍光色素が凝集することがある。遠心器で15000rpm、4℃、5min遠心し、凝集物を取り除いて使用する。蛍光色素のゴミが多いときは、より強く遠心する」
とのことです。たしかに20minはちょっと長い気がしますよね。ちなみに、わたしはあまりそのゴミが気になったことはないので、卓上遠心器で軽く遠心する程度にしています。
ご回答ありがとうございます。私もまさにその本を見て「長く遠心した方がいいのか」と思ったわけです。しかし、その根拠が見つからず、また、抗体が(ボスの言うように)遠心で沈殿してしまうのかどうか、も知りたかったので、質問させていただきました。
biotin-streptavidin法で検出していますが、streptavidin conjugated Alexa fluor 488,546を二次抗体として使用しています。この2次抗体は結局1000rpm, 20minで沈殿しないことは確かめられました。まだ15000rpmではためしていません。
とにかく、皆様に早速ご回答いただいて感激しました。ありがとうございます。
No.2
- 回答日時:
何の実験でどのような結果が出て、質問者さんはDebrisのようなものと判断されたのでしょうか?
どこの何のプロトコールだったか忘れましたが、
製品の中の抗体と未反応のAlexa Fluor蛍光色素を実験に持ち込まないように遠心してから使用しろ、
と書いてあるのを見た記憶がありますが、私は遠心して実験したことありません。個人的には関係無いと思っています。
もし、Debrisのようなものを無くしたいと考えて質問されているのなら、遠心するかしないかはあまり関係無いかもしれません。
いずれにしても、もう少し状況を詳しく教えていただければ
力になれるかもしれません。
この回答への補足
回答ありがとうございます。私は初めて使い、ボスに「沈殿してしまうかも」と言われ、長く遠心してもよいものかどうか迷っていました。上の方のお礼にも書きましたが、今回は遠心したことが良かったようです。ありがとうございました。
補足日時:2008/04/17 01:22No.1
- 回答日時:
それはテクニカルな話なので、普通、メーカー以外の資料はない(メーカーの資料ももしかしたらない)と思います。
なんの結果にDebrisがあるのか不明ですが、両方試しましょう。
早速の回答ありがとうございます。共焦点顕微鏡で蛍光抗体の結果を観察した際に、alexa fluorの塊のようなスポットが見えていたのです。昨日、1000rpm,20min遠心して上清を使用したところ、ほとんどなくなりました。メーカーの資料にも、ほとんど遠心のことは書いておらず、迷っていました。ありがとうございました。
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