閲覧ありがとうございます。
今年10月にバイオ系の研究室に配属されました大学3回生です。
以前細胞の継代について質問させて頂き、お陰様でようやくパスは安定して出来るようになりました。
現在、96wellプレートを用いたグロースのカウント(培養)が上手く出来ず大変困っています。
癌細胞(浮遊、接着)を細胞培養専用のフラスコを使って培養しています。
継代の際は、細胞液をチューブに移して遠心にかけ、上清を吸って培養液(RPMI)を入れ数個のフラスコに分けます。
その際、その細胞液をさらに培養液で希釈し2×10^4cell/mLで100μLずつ96wellプレートに播種し、毎日グロースを算定板を用いてカウントします。
3回くらい播種しましたが、毎回細胞が思うように増えず、恥ずかしながら多くても本来のピークの1/10程度です・・・
フラスコに継代した細胞は順調に育ち、播種後のプレートを顕微鏡で覗いた時は大体均等に細胞が確認出来るのですが、その後培養液の色はほとんど変わらず・・
プレートは一日UVに当てる、マイクロピペットでのピペッティングを十分に行うなど自分なりに気をつけているのですが、何度も失敗しているので播種する時の操作が悪いと考えてます。
同級生も皆同じ方法で播種し、カウントしているのですが結果は結構ばらついていて、自分のようにピークが極端に少ない人もいるようです。また、一番上手くいっている人でもピークは昨年の先輩のデータの半分程でした。
初めは1×10^4cell/mLで播種しましたが、育ちが悪いので2×10^4cell/mLに変更しました。
しかし結果はほとんど変わらず、死細胞が極端に多くなります。
細胞播種の操作で、気をつけるべき事やここで失敗しやすいなど、アドバイスがあれば教えて頂きたいです。
また、プレート内の接着細胞をはがす際、どのくらいの間EDTAに浸ければ良いのかも知りたいです。何度もピペッティングすれば大丈夫なのでしょうか?
あまり長い間EDTAを入れていたら細胞が死んでしまう様なので…
質問が多くて申し訳ございませんが…
安定して良い結果を出せるように頑張りたいので、よろしければアドバイスをお願いします。
A 回答 (1件)
- 最新から表示
- 回答順に表示
No.1
- 回答日時:
他にどういう配属があるの?
将来も培養作業しないなら無理に頑張る事ないよ。
友達に甘えながらする事です。ノウハウだから独りつっばしっても上手くいかないよ。ペレットを見ずに吸う人はそうなんだよ。
メクラウチは事故の元でしょ。
顕微鏡で観るんですよ。全ての作業の前後で。目視で確認です。
そういうノウハウを指導されないなら真面目にならなくていいです。遊びなさい。課題よりも細胞を眺めて何かを発見なさい。それが生物学生命学です。
去年との比較は、フラスコの細胞の性質があるからね、継代のやり方にまでさかのぼります。
培養というのは細胞の飼い方なんですよ。剥がし方じゃないんですよ。
飼い方で性質が違ってきます。その性質を調べてるんですよ。話がアベコベなんだけど…アベコベ馬鹿先生ばっかりで教室ごと分かっていないのが普通だからね。あなたが苦しむことありません。
友達の継代を使う。
無理しないで友達に飯をおごる事。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
このQ&Aを見た人はこんなQ&Aも見ています
-
準・究極の選択
「年収1000万円で一生カレーライス」か 「年収180万円で毎日何でも食べ放題」 あなたはどちらを選びますか?
-
フォロワー20万人のアカウントであなたのあるあるを披露してみませんか?
あなたが普段思っている「これまだ誰も言ってなかったけど共感されるだろうな」というあるあるを教えてください
-
映画のエンドロール観る派?観ない派?
映画が終わった後、すぐに席を立って帰る方もちらほら見かけます。皆さんはエンドロールの最後まで観ていきますか?
-
海外旅行から帰ってきたら、まず何を食べる?
帰国して1番食べたくなるもの、食べたくなるだろうなと思うもの、皆さんはありますか?
-
天使と悪魔選手権
悪魔がこんなささやきをしていたら、天使のあなたはなんと言って止めますか?
-
96穴plate細胞のまき方
生物学
-
細胞の均一な播き方
生物学
-
MTTアッセイ時のコツについて教えてください。
生物学
-
おすすめ情報
- ・漫画をレンタルでお得に読める!
- ・人生のプチ美学を教えてください!!
- ・10秒目をつむったら…
- ・あなたの習慣について教えてください!!
- ・牛、豚、鶏、どれか一つ食べられなくなるとしたら?
- ・【大喜利】【投稿~9/18】 おとぎ話『桃太郎』の知られざるエピソード
- ・街中で見かけて「グッときた人」の思い出
- ・「一気に最後まで読んだ」本、教えて下さい!
- ・幼稚園時代「何組」でしたか?
- ・激凹みから立ち直る方法
- ・1つだけ過去を変えられるとしたら?
- ・【あるあるbot連動企画】あるあるbotに投稿したけど採用されなかったあるある募集
- ・【あるあるbot連動企画】フォロワー20万人のアカウントであなたのあるあるを披露してみませんか?
- ・映画のエンドロール観る派?観ない派?
- ・海外旅行から帰ってきたら、まず何を食べる?
- ・誕生日にもらった意外なもの
- ・天使と悪魔選手権
- ・ちょっと先の未来クイズ第2問
- ・【大喜利】【投稿~9/7】 ロボットの住む世界で流行ってる罰ゲームとは?
- ・推しミネラルウォーターはありますか?
- ・都道府県穴埋めゲーム
- ・この人頭いいなと思ったエピソード
- ・準・究極の選択
このQ&Aを見た人がよく見るQ&A
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
多細胞生物の細胞の大きさは、...
-
BSA溶液の作り方。
-
mock細胞とは?
-
遠心分離の際の回転数の決め方
-
細胞膜の選択透過性と半透性の...
-
ベルーマジャンディーの法則に...
-
RAW264.7マクロファージについて
-
塩酸 なぜ あたためる?(細...
-
神経繊維と細胞体について
-
濃度計算。
-
どのくらいの期間で、細胞は、...
-
限界希釈法について
-
細胞っていくつくらいの原子か...
-
Nエチルマレイミドの使い方
-
生物の実習で使った細胞につい...
-
ヒトが飲食できる最高の温度は?
-
細胞数と濃度計算
-
細胞播種(96well)のコツを教え...
-
羊膜細胞は胎児由来?母親由来?
-
多核の細胞はどのように細胞分...
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
BSA溶液の作り方。
-
(自由研究)免疫細胞のまとめ方(...
-
mock細胞とは?
-
細胞膜の選択透過性と半透性の...
-
太古の昔異種の微生物同士が共...
-
遠心分離の際の回転数の決め方
-
野菜と肉からのDNA抽出
-
接着面とはどこのことですか?
-
RAW264.7マクロファージについて
-
今日謝って、非働化済み牛胎児...
-
糖の貯蔵
-
グリセロールストックについて?
-
食べて増えた700グラムはどんく...
-
予定運命と発生運命の違いは?
-
パーセンテージで得られた結果...
-
細胞っていくつくらいの原子か...
-
Cell LineとPrimary Cellの違い
-
ヒトが飲食できる最高の温度は?
-
生理食塩水の0.85%と0....
-
DNA小学生への説明
おすすめ情報