A 回答 (4件)
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No.4
- 回答日時:
まずはコンストラクションの確認ですよね。
あと株も同じものを使っているのですよね?
やはり何とかしてタンパクの発現を確認するのが最初だと思います。
これらの実験の経験、ラボの状況などを教えていただければもう少し的確なことが言えるかも知れませんが。
No.3
- 回答日時:
すみませんが,masa23 さんはお書きの様な実験の経験はどの程度お有りでしょうか。他の蛋白では問題なく発現されますか。
私自身は専門外ですが,知人に「H+,K+-ATPase」の研究を行なっている者がいます。彼の話などを聞いていると,お書きの実験は操作はそんなに難しくない(4年生の卒業研究でも行なえる)が,微妙なところにコツがいるようです。
先の回答者へのお礼の中で「論文では同じような条件で」とありますが,同じ条件だと思っているだけで,その微妙な違いが問題なのかも知れません。全く同じ条件ではやれないでしょうか。
もし,蛋白発現の経験があまりないのであれば,面倒でも一つ一つ確認して,どこに問題があるかを明らかにするのが,最初のステップだと思います。
まづ,cDNA はきちんと作れているか,組み込みは行われているか,mRNA はできているか,タンパクはできているか,等々を確認する必要があるでしょう。この辺は,ノ-ザンブロット,サザンブロット,ウエスタンブロット等で確認できると思います。
あまりお役に立たないかも知れませんが,ご参考まで。
この回答へのお礼
お礼日時:2001/06/28 16:22
丁寧な回答ありがとうございます。
こういう実験は、初めてです。
アドバイスにあるように再度、条件、cDNAなど一つ一つ確認してみます。
ありがとうございました。
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