No.5
- 回答日時:
>このような場合は、aminolinkまたはmicrolinkで固定化すると良いのですね?
反応可能な遊離基があれば、うまくいく「かも」。いかないこともあります。
免疫染色がウエスタン(分子が小さすぎ?!)なのか細胞染色なのかよく分かりませんが。両方、ペプチドをいれて抗体をいれればいいような気がしますがねえ。
細胞(組織)染色だと、蛍光を使った場合、顕微鏡や画像処理ソフトで弱いシグナルが強く補正されてしまうことがありますけど、、、また、endothelin-1は分泌されて(?)細胞(組織)にとどまらないような気が?レセプターとendothelin-1複合体をみるのでしたら、endothelin-1がうまく固定されてないとやばいですよね。(はずしてるかも)
この回答への補足
組織染色を行なっております。
多くの論文が上手く染めているようなので、特に疑問を感じずに行なっています。
アセトン固定であれば細胞内のペプチドが流出しないと聞いているものですから。。。
No.4
- 回答日時:
あなたのペプチドに反応可能な遊離基が必要です。
私なら、固定化カラムに吸着したものとしないもので充分な差が出ればよしとします。
ペプチドというのは、endothelin-1で、アミノ酸配列は、Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp です
(Disulfide bonds between Cys1-Cys15 and Cys3-Cys11)。
このような場合は、aminolinkまたはmicrolinkで固定化すると良いのですね?
遠心しても上手くいかない時は試してみます。
ありがとうございました。
No.2
- 回答日時:
確実に沈殿させるなら、Protein AまたはG(担体に結合させたものならなお効果的)を加えると良いかと思います。
どれだけまで過剰の抗原で吸収させておられるのかわかりませんが、本当に十分量いれてもシグナルが残っているなら、まさに非特異的抗体が反応しているという可能性を示しているのでは。まず、抗体をアフィニティー精製するとか、非特異的抗体を吸収で除くとかしてからやった方がいいかもしれません。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
おすすめ情報
- ・漫画をレンタルでお得に読める!
- ・人生のプチ美学を教えてください!!
- ・10秒目をつむったら…
- ・あなたの習慣について教えてください!!
- ・牛、豚、鶏、どれか一つ食べられなくなるとしたら?
- ・【大喜利】【投稿~9/18】 おとぎ話『桃太郎』の知られざるエピソード
- ・街中で見かけて「グッときた人」の思い出
- ・「一気に最後まで読んだ」本、教えて下さい!
- ・幼稚園時代「何組」でしたか?
- ・激凹みから立ち直る方法
- ・1つだけ過去を変えられるとしたら?
- ・【あるあるbot連動企画】あるあるbotに投稿したけど採用されなかったあるある募集
- ・【あるあるbot連動企画】フォロワー20万人のアカウントであなたのあるあるを披露してみませんか?
- ・映画のエンドロール観る派?観ない派?
- ・海外旅行から帰ってきたら、まず何を食べる?
- ・誕生日にもらった意外なもの
- ・天使と悪魔選手権
- ・ちょっと先の未来クイズ第2問
- ・【大喜利】【投稿~9/7】 ロボットの住む世界で流行ってる罰ゲームとは?
- ・推しミネラルウォーターはありますか?
- ・都道府県穴埋めゲーム
- ・この人頭いいなと思ったエピソード
- ・準・究極の選択
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
ELISA
-
バルク溶液
-
ウェスタンブロットについて質...
-
ウェスタンブロットのサンプル...
-
抗体は移植できますか?
-
抗体検量線について
-
免疫染色実験でに「each run」...
-
蛍光抗体法でホルマリン固定の...
-
血液中には何に対する抗体が多...
-
ウエスタンブロットでのフィル...
-
オートクレーブの際にピペット...
-
ヨーグルトは腐らないって本当...
-
世代時間の計算(微生物学)
-
ショックです・・ネズミのフン...
-
鳥のフンについて。鳥のフンは...
-
炭を分解する生物
-
ピーナツのこのカビはアフラト...
-
トランスフェクションでの培地...
-
酢酸カーミンとアセトカーミン
-
ヨーグルトが凍ると菌は死ぬ?
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
おすすめ情報