HPLCピークの同定について

HPLCで初めて分析した成分のピークがどれか分からず困っています。
このメソッドはまだ開発途中で、取り敢えず分析できるか確認する為に行ないました。

測定したサンプルは以下の通りです。
(1)1、5、10mg/mlのSTD溶液（溶媒はミリＱ水）
(2)ミリＱ水のみ（ブランク用、STDの溶媒でもあるため）
(3)りん酸緩衝液（移動相に使用しているもの）
(4)アセトニトリル（移動相に使用しているもの）

単純に(2)～(4)で現れなかったピークがSTD（分析対象成分）だと考えたのですが・・・。
STDでは3分あたりに形が変な大きなピークが現れたのに対して(2)～(4)にはそのピークはなく、
STDの8分あたりにそこそこきれいなピークがあって(2)～(4)にはない。

この結果から、3分あたりに現れた大きなピークが分離に失敗したSTDなのか、
8分あたりに現れたそこそこきれいなピークがSTDなのか、分からないのです。
8分あたりに現れたピークは、面積がきちんと濃度によって比例していました。
しかし、これがSTDだと断言できるかといったら、正直不安です。

どのようにしたらＲＴが分からない成分を特定することができるのでしょうか？

分かり難い質問になってしまい申し訳ありませんが、ご意見を伺えたら幸いです。
宜しくお願いします。

No.3 回答者： elpkc 回答日時： 2008/10/23 12:50

3分のピークはソルベントピークだと考えられますが、

移動相は測定していないのですか?
それがほとんどピークとして検出されなければ、
問題無しです。

この回答へのお礼

回答ありがとうございます！
移動相は測定しましたが、移動相の3分までのピーク（ノイズくらいに小さい）とSTDの3分までのピーク（とても大きくていびつな形）は全く違うものでした。
STDをミリQ水で作成したので、ソルベントピークの可能性が高いですね。
再度チャレンジしてみます。

お礼日時：2008/10/23 21:24

No.2 回答者： ooooaaadd 回答日時： 2008/10/22 22:53

成分の特定となると、分取してMSやIR，NMRで分析ということになるかと思います。

あるいは、成分の見当がついているでしょうから液クロメーカーのデータ集に当たってRTを調べてみる。
あるいは乱暴ですが、8分のピークが濃度と面積で比例するならこれをSTDの成分としてしまう。

この回答へのお礼

回答ありがとうございます！
メーカーのアプリケーション集を参考に分析したのですが、
目的成分のRTが3分だったので、
やはり分離がうまくいかなかったのか？と思ったのですが、
その変な形のピークは濃度に関係なく同じような面積だったのです。
しかも使用したカラムがアプリケーション集と同じ物ではないので、
RTも変わってくるのだろうと考えると、
やはり8分のピークが目的成分なのか？といった具合に分からなくなってしまいました・・・。
もうちょっと追求してみます。
ありがとうございました！

お礼日時：2008/10/23 00:17

No.1 回答者： air_jp 回答日時： 2008/10/22 22:46

濃度に比例しているので，8分がStdのピークと思います。

3分のピークは溶媒ショックのピークと思います。

3分のピークを小さくするには、
Stdを移動相（gradientなら初期条件）で希釈することです．
3分というのは、LC条件がありませんが、恐らく
カラムが4.6×150mm、流速が0.8～1.0mL/minと思いますので、
カラムの1倍量が溶出した時間が2.5～3分になります。

移動相での希釈を挑戦してみて下さい。

この回答へのお礼

回答ありがとうございます！
溶媒ショックのピークなんていうものがあるのですね。
STDを移動相で希釈してみます。
＞カラムが4.6×150mm、流速が0.8～1.0mL/minと思いますので
全くその通りです！さすがですね。
とても参考になりました。

お礼日時：2008/10/23 00:07