CSF(脳脊髄液)をアセトン沈澱させようと調べると
(1)サンプル+サンプルの100倍量のアセトンを
ON ICEで30分、その後遠心30分(4℃12000rpm)
(2)サンプル+サンプル3倍量の冷アセトンを
-20℃で2時間インキュベート後、遠心5分(1000rpm)
など方法がいろいろで、どれが最適かわかりません。
予想するに、遠心を長時間使えない状態だったり
電気代を考えると(2)が良いのでしょうか。
A :目的タンパクによると思いますが
いったい何がどう最適かは、そのタンパクによるんでしょうか?
B:それぞれの条件をかえてどれが回収率が最適か
自分で検討するしかないのでしょうか?
C:アセトンを加える量にこんなに差があっていいんでしょうか?
(1:100と1:3というのは・・・)
No.1ベストアンサー
- 回答日時:
>予想するに、遠心を長時間使えない状態だったり電気代を考えると(2)が良いのでしょうか。
遠心機を30分使えないとか、その程度の電気代をケチらないといけないのなら、実験にはなりません。考えすぎです。
A タンパクの場合、熱に不安定なものが多いので、低音は常識。私が学生時代は、氷で冷やしておく程度でしたが、今では-20℃も難しくはないハズ。
B 氷で冷やす程度で良いか否かは、回収率で判断すべき。遠心も、1000rpmでは、落ちない気がしますが、これもタンパク次第。私の場合は、静置程度でOKでしたが。
C 100gのサンプルに100倍加えると、10リットルになり、遠心が大変。1mgのサンプルに10倍では0.01mlにしかならず、沈澱の有無は見えないでしょう。添加量は、常識での判断。
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