No.3
- 回答日時:
私は200μLのピペットマンなどでゲル板を伝わらせて、重層していますが、特に乱れたことはありません。
以前、重層した直後に、ゲルをシーソーのように揺らしていたことがあったのですが(先輩の教えで)、その時はたまに界面が乱れていました。その後、重層した後には一切ゲル板にさわらないようにしてからは、界面が乱れたことはありませんよ。
TEMEDやAPSの濃度は適量ですか?
ちなみに、ストーブやドライヤーで暖めて早く固まらせようとすると界面が噴火します(しました)。
うまく行くと良いですね。
No.2
- 回答日時:
補足です。
グリセロールは基本的に泳動には影響を与えないので安心して使用できます。
(小さいタンパク質を分離する際に、ゲル内での拡散を抑えるために加えることもあります。)
ブタノールを試す場合は、濃縮ゲル溶液を注ぐ前にブタノールを除き、さらに水か泳動バッファーで分離ゲル上端を軽く洗ってください。
ブタノールが残っていると、濃縮ゲルがきれいに固まらないことがあります。
No.1ベストアンサー
- 回答日時:
アクリルアミドは酸素があると重合が阻害されますし、結局泡なんかで表面が乱れるので重層した方がいいと思います。
改善の余地としては、例えば分離ゲル溶液に~10%程度になるようにグリセロールを入れると比重の違いにより混ざり合いにくくなります。
もしくは、水より比重の軽い溶媒を重層する方法があります。例えば、水で飽和させた1-ブタノールなど。
具体的には50mlのチューブなどに、水とブタノールを半分ずつ位加えてシェイクし静置、ブタノールは上層、水は下層に分離するので上層を使用してください。
どちらか一方でかなり改善されると思いますので、楽そうな方をお試しください。
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