FACSについて

はじめまして。
はじめて投稿するので、わかりにくいと思いますが、よろしくお願いします。

酵母のcell cycleの状況をみたいのですが、FACSのプロトコルに70%エタノールを加えて4℃でインキュベートと書いてあり、一週間は保存可能と書いてあったのですが、エタノールで細胞周期をその時の周期で固定できるのでしょうか？酵母はエタノールも栄養になると何か聞いた事があるので、コントロールの酵母もG1とかどこかの周期まで進んでとまってしまいそうなイメージがあるのですが・・・
どうか教えてください。

後酵母でFACSを使ってcell cycleを見たことがあるかたに質問なのですが、PI濃度を教えて欲しいです。1.6μg/mlを30分放置では濃いでしょうか？
コントロールなど、普通に本倍養しているだけなら、G1からM期まで全ての酵母がいて、NとN2の山二つがFACSの解析の時に見えるんじゃないんですか？Nか２Nの山一つしかみえないですし、FACSが成功しているのか、していないのかの判断をどうつけたらいいのかわかりません。お願いします。

No.2 ベストアンサー 回答者： nonnon1190 回答日時： 2008/06/20 17:51

http://www.jstage.jst.go.jp/article/jems/26/2/11 …

全く関係ない私が、鼻くそをくじりながらちょっと検索をかけただけで見つかる上記の資料が、どうして「必死に見つけているはず」の質問者様には見つからないのでしょうか？

やり方は、おそらく細かいやり方まで書いてないと思いますが、リファ
レンスを調べてください。

70%エタノールで酵母がどうなるとか、すみません。自分で調べてください。

どうして日本酒は１２％くらいのアルコール濃度なのか？
それ以上の酒はどうやって作られているのか？
細胞、組織などの固定とは何か？どうやってやるのが一般的か？

調べてください。
少なくとも最初の２つは知らないなんてほんとに恥ずかしいです。

No.3 回答者： nonnon1190 回答日時： 2008/06/20 18:06

http://jstore.jst.go.jp/cgi-bin/patent/advanced/ …

その図
http://jstore.jst.go.jp/cgi-bin/patent/advanced/ …

No.1 回答者： nonnon1190 回答日時： 2008/06/19 18:30

>酵母はエタノールも栄養になると何か聞いた事があるので、コントロールの酵母もG1とかどこかの周期まで進んでとまってしまいそうなイメージがあるのですが・・・

FACSを使うくらいの人がこのようなことを言っていることに驚きました。
生物を勉強していないのですか？

FACSの機械が何かわかりませんが、使い方を知っている教官や先輩はいらっしゃらないのでしょうか？
コンペンセーションのかけ方、ゲートのかけ方など、ここでどうこう言えることではありません。
まず、身近に居る人に聞きませんか？

この回答へのお礼

本当に知識がなくてすみません。

エタノールで酵母のcell cycleを固定できるのかが、どこを調べればいいのか調べ方がわからなくて、聞いてしまいました・・・
酵母のタンパクの局在などを見る時に、パラホルムアルデヒドで固定などはした事があるのですが、エタノールだと心配で・・・
実際のところは、どうなのでしょうか？

やはりG1までいって細胞周期は止まってしまうのでしょうか？
ちゃんと固定されるのでしょうか？

FACSの機械はJSANです
使い方は、なんとなくわかりますが、身近な人は酵母のFACSを
した事がない人ばかりなので、データの解析の仕方というか、
本当にあっているのかの判断がつかなかったんです・・・

酵母は液培で普通に飼っていたもののcell cycleをみたら、
Nと２Nの山がちゃんと見えるものなのでしょうか？
本を見てもそうゆう基礎な事は書いてないようなので、
すみません・・・

お礼日時：2008/06/19 19:56