核酸の抽出と定量の実験(基礎技術の習得が目的)を行いました。
DNA、RNA量をもとめた後に、RNA/DNA比をもとめるよう指示されました。この比は何の目的で出すのですか?この比を出すと何がわかるのですか?誰か教えてくださ~い!簡単な説明で結構です!
あと、核酸の抽出と定量を行うことによって、どんなことに応用できるのですか?

質問多くてスミマセン(>_<)
これらのことに詳しい方、よろしくお願いします!

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A 回答 (3件)

補足拝見しました。



全く自信がないですが、あえていえば、比が1より大きければ、RNAが多い。
RNAはどうやってできるの?
逆ならなんでRNAが少ないんだろう。少ないということは、何のできる量が
減る?他の臓器ではどうなるのでしょう?
こんなところから詰めていくのかな?と思ったのですけどね。
ただ、回収率をディスカスする必要もあるので、そこもポイントかも?
過去の知見がありそれと大きくずれるとしたら、ラットの体調(年齢とか)
それとも、回収の方法。特にRNAは不安定ですから。
あとRNAはODだけで見たようですが、その方法の精度は?
例えば、DNA,RNAの除去が完全でなければどうなる?

と、あれこれ話はありそうです。

ただもっと何かクリティカルな考察をせねばならないかもいけない
可能性が捨てきれず、全く自信なしです。ごめんなさい。
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この回答へのお礼

回答ありがとうございます!
なるほど、こういう見方もあるのかぁ、と思いました。
参考にさせていただきます!

お礼日時:2002/01/20 09:05

rei00さんお久しぶりです。



rei00さんの回答もありかな?と思ったのですが、実習内容によってはただ単にDNAの純度を求めるだけかとも思ったのですがどうでしょう?
ねらったのは核酸全部ですか?それともDNAだけですか?
それによってわかるとおもいます。

取り出し方がわからないので何ともいえませんけど。
どうですかね?

後半は、実験のテキストでもみれば、核酸抽出後の実験があると思います。
シーケンスやら、PCRやら。
その辺の本をご覧になったらと思います。

この回答への補足

ラットの肝臓のホモジネート液を、脂質除去、蛋白除去などしていき(PCAを加えて遠心を繰り返したり、KOHに溶かしたり)、最終的に遠心で上澄み(RNA)と沈殿(DNA)にわけます。RNAはOD260nmで吸光度測定し、DNAのほうはジフェニルアミン(多分・・・)でデオキシリボースを発色してOD600nmで吸光度測定します。
とりあえず、こんな感じで実験しました。
もっとちゃんとした実験ならPCRとか使うのでしょうけど、なにぶん学生実験なので・・・。

補足日時:2002/01/19 18:55
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> この比は何の目的で出すのですか?


> この比を出すと何がわかるのですか?

 インフォシ-クで「RNA/DNA比」を検索したところ5件ヒットしました。その中で次の3件の記載が参考になるかと思います。

http://www.nrifs.affrc.go.jp/news/news11/matukaw …
(脂質化学研究室(利用化学部))
 ・・・RNA/DNAを用いて動物プランクトンの栄養状態と活性を判定するという新しい分野を拓いた・・・

http://www.affrc.go.jp/seika/data_suisan/h06/jsn …
(ヒラメ種苗放流場の餌料条件の把握)
 ・・・摂餌率、摂餌量、栄養状態を示すRNA/DNA比、・・・

http://www.myg.affrc.go.jp/tnf/news46/ame.htm
(1年間のアメリカ生活を振り返って)
 ・・・核酸比(RNA/DNA)の定量や耳石日輪解析によって、個体レベルで仔稚魚の健康状態や成長速度を調べる・・・

 これらから考えると,RNA/DNA 比で分かるのは栄養状態や成長状態のようです。


> 核酸の抽出と定量を行うことによって、
> どんなことに応用できるのですか?

 現代の生命科学にとって分子生物学と遺伝子工学の発展は必須のものです。これら(分子生物学,遺伝子工学)は核酸に関する学問と言ってもいいぐらいのものですので,「核酸の抽出と定量」は生命科学の基礎と言ってもいいほどです。
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この回答へのお礼

回答ありがとうございます!参考にさせていただきます!

お礼日時:2002/01/19 18:57

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Q核酸抽出:RNAとDNAの違い

核酸を精製・抽出する際、DNAは中性フェノールを用いるのに対し、RNAは酸性フェノールを用いるのは何故ですか?
特に、DNAが中性フェノールを使う利点を詳しく教えてください。よろしくお願いします。

Aベストアンサー

>中性フェノールでは水層にDNAとRNAの両方が残ることにはならないのでしょうか?中性フェノールではどのようにDNAを抽出できるのかがまだ理解できません。

RNA精製(AGPC法)における酸性フェノールの意味はご存知(?)なので割愛します。

もともと、DNA精製におけるフェノール処理の目的は「タンパク質の除去」です。
なので、

>中性フェノールでは水層にDNAとRNAの両方が残ることにはならないのでしょうか?

なります。っていうか、こうなってあたり前なのです。

DNA精製でRNAを除きたい場合は、RNAを分解するRNaseAなどを加えます。

Q高校一年生物基礎です。 RNAとDNAの違いがわかりません。 DNAは2本鎖でRNAは1本鎖。 糖が

高校一年生物基礎です。
RNAとDNAの違いがわかりません。
DNAは2本鎖でRNAは1本鎖。
糖がデオキシリボースと
リボース。
塩基がTとUの違いくらいしかわからず、
どういう風に違うのか具体的に
知りたいです。

Aベストアンサー

たぶん。
元々RNAだった。
でも、RNAは分解されやすい。すぐ壊れちゃう。
あなたの元の遺伝子がすぐに壊れちゃったら困るでしょ?
それで、強化版としてDNAができた。(この辺りの進化の話が本当かどうかは確認していません。眉に唾をつけておいてください。)
リボースとデオキシリボースの構造の違いを見てください。
そこを変えると、保存性がぐっと上がった。
石→青銅→鉄と武器が変化するようなものか。

RNAだって二本鎖になりますよ。
でも、特にメッセンジャーRNAは対のRNA鎖ができても邪魔なだけでしょう。
逆に、壊れやすいというのは、そのうち壊れてくれる、ということでもあるでしょう。
メッセンジャーRNAがもの凄く頑丈だと、いつまで経っても壊れないから、もうその蛋白は要らない、というときでも作り続けてしまうかもしれない。
そんなこんなで、DNAを使っている生物では、RNAはDNAとは違う使われ方をしている、ということになります。
元本が石版で、あなたはそれをコピー機でコピーした紙で読んでいるような感じか。

後は追々、どう使われているか、全体像をしっかり捉えてください。
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大体苦手としている奴が暗記暗記と言っていて、だから苦手なんですが。
そうではなく、教科書参考書を読み、授業を聴き、全体像をきちんと理解把握して、それで頭に入らなかった語句を丸暗記するようにして下さい。
理解把握の網に、暗記事項を引っかけていく感じ。
最初から丸暗記だと、意味の解らない言葉をただ暗記力に頼って覚えていくことになりますので、暗記力が余程優れた人で無い限り、挫折します。
また、例えばセンター試験は、丸暗記が通用しないように作られていますので、丸暗記バカは模試は良くても本番が壊滅したりします。
生物学を必要とするような専攻であれば、語句を丸暗記しただけのような人間を求めているわけでは無いのですし。

たぶん。
元々RNAだった。
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QDNAとRNAの存在比

大学の実験でウシの肝臓を使って、DNAとRNAの抽出と定量を行いました。実験結果ではDNAとRNAの存在比が1:2になりました。
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Aベストアンサー

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fgはフェムトグラム、フェムトは10^-15
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つまりRNAのほうが質量100倍あるんですね。

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細胞図を見ると、DNAはよく表示されてますが、RNAは見かけません!
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おおざっぱにいえば「いろんなところ」にあります.

例えば mRNA は核 DNA をもとに合成され, そこにリボソームがついて蛋白質が作られていき, 最終的に不要になれば分解されます. そしてリボソームで蛋白質を作るためにはアミノ酸をもってくる tRNA が必要. さらにはリボソーム自身が rRNA を持っています.

QDNA抽出実験でDNAが消えた・・・

実験でブロッコリーと鳥のレバーからそれぞれのDNAの抽出を行いました。
方法は以下のとおりです。

両試料を冷凍させてから(ブロッコリーは穂先のみを)すりおろし、たんぱく質を切り離すため界面活性剤を加えて、乳鉢・乳棒を使ってよくすりつぶす。
2M食塩水を40ml加え5分ほど湯銭にかけ、ガーゼで濾過する。
ろ液を良く冷やして、冷エタノール20mlを静かに入れる。

ここでまだ不純物を含んだDNAが繊維状になって出てくる。--------★

巻き取ったものを別のビーカーに入れ、2M食塩水40mlを加えてよく溶かす。
再び湯煎する(3分間)。
厚いうちに濾過をする。
ろ液を良く冷やしてから、冷エタノール20mlを静かに入れ、ガラス棒で静かにかき混ぜる。
すると純度の高いDNAがでてくる。

といった実験だったのですが、鳥レバーに関してはうまくいったのですが、ブロッコリーのDNAが★の時点ではかなり多く出てきていたのに最終的に影も形も出てきませんでした。

最初の試料の量が少なかったのかと思い、試料量を二倍にして同じようにしてみたのですが、やはり★の時点では出てくるのに最終地点では消えてしまいました。
どんな理由が考えられるのでしょうか?
教えてください!

なお最初の試料量は穂先だけで20gを用いました。
最終の時点での溶液は浮遊物もなく無色透明でした。
冷エタノールはあらかじめ冷蔵庫で冷やしていたものを用い、加える量を増やしても変化はありませんでした。

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Aベストアンサー

DNA分解酵素(DNase)によって分解してしまったのでは。DNaseは材料となる生物試料の中にはもちろん、環境中(手垢、汗、つば、器具や試薬の汚れ、ホコリなど)に普通にあるものです。研究の現場では、器具や試薬は蒸気釜で滅菌したものを使い、試料中のDNaseがすばやく不活性化するように試薬や手順が工夫されています。

今回はそこまで厳密な実験ではないようですから、DNaseの影響はかなりあったでしょう。レバーからうまくいったのは、たまたま試料中のDNase活性が低かったからではないでしょうか。

湯煎は何度でやりましたか。おそらくここでしっかり熱を加えておけばDNaseはほぼ完全に失活し、うまくいったのではないでしょうか。研究室でやる方法では、タンパク質が変性し、DNAが変性しない温度、65度から70度くらいで、最低でも10分から15分は加熱します。液量が40 mlもあると失活温度に達するのに時間がかかり、酵素反応に適した温度がかなり続いたと思います。すばやく失活温度にするように工夫したほうがいいですね。


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