ジデオキシ法について

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質問者：painself
質問日時：2010/02/04 03:21
回答数：1件

しょうもない質問かもしれませんが、答えていただけると幸いです。
ジデオキシ法についてです。（PCRによる応用は考慮していません）
ddNTPを加えることによって伸長反応が途中でストップし、様々な長さの断片ができるとあるんですが、
ということは、鋳型となるDNAやプライマーは多量に加えられているということなんでしょうか？
また、合成されたDNA鎖は１本鎖に変性させることなく、
そのまま鋳型も含まれた状態で電気泳動にかけるのでしょうか？

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回答 (1件)

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No.1

回答者： teru-arai
回答日時：2010/02/08 00:03

＞鋳型となるDNAやプライマーは多量に加えられているということなんでしょうか？

現在の蛍光によるやり方、アップライドバイオシステム社のプロトコールでは（PCRしますけどね）、反応液中、鋳型（普通のプラスミドとして）数百ng、プライマー3.2pmolとなってますね。

＞また、合成されたDNA鎖は１本鎖に変性させることなく、
変性させないと当然駄目です。更に2次構造の形成を押さえるためにゲルにはウレア等が入っています。

＞鋳型も含まれた状態で電気泳動にかけるのでしょうか？

１本鎖にしたあとは別に分けることはしません