No.2ベストアンサー
- 回答日時:
前後の文脈がわからないので、正確には答えられませんが、最後の質問から推察するに定量的PCRに関する質問と理解しました。
その理解の下で回答します。PCRは、理論的には1サイクルごとに2倍ずつ増えていきます(指数関数的増幅)。よって、横軸にサイクル数、縦軸にPCR産物の量(指数)を取ると、あるサイクル数から直線的に増幅します。これがPCRにおけるDNAの増幅に与えるサイクル数の影響だと思います(PCR産物は「2のサイクル数乗で増える」)。定量的PCRでは、この指数関数的な増幅が起きるサイクル数(Ct値と呼ぶ)から、元のサンプル量を予測・定量します。このサイクル数が小さいほど、DNA量が多い。
ここで具体例で考えます。目的の遺伝子XのcDNA量が異なる3種類サンプルがあるとします。
サンプルAは10個、サンプルBは100個、サンプルCは1000個。
これらのサンプルをPCRすると、DNA濃度の高いのサンプルCから指数関数的な増幅が見られます。さらにサイクル数を増やすと、サンプルBも増えます。さらにサイクル数を増やすとサンプルAも増えます。このようにDNAの濃度が高い方が少ないサイクル数でDNAが増幅します。これがDNAの増幅に与えるDNA濃度の影響です。
しかし、サイクル数が増えていくと、反応が飽和して、それ以上PCR産物が増えなくなります。まず、サンプルCが飽和して、次にサンプルBが飽和し、最後にサンプルAが飽和します。よって、すべてが飽和してしまうと、最初のDNA濃度は各サンプルで違うにも関わらず、どのサンプルのPCR産物の量も同じになってしまいます。よって、正確に定量出来なくなってしまいます。これが「PCRでサイクル数が多くなるとDNA濃度に依存しないで飽和状態」です。この原因は、PCR反応が繰り返されるにつれて、基質であるプライマーやdNTPが不足すること、酵素の失活、副産物のピロりん酸による反応の阻害などが考えられます。
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