ＤＮＡ組み換えタンパクの発現

ヒトのタンパク質を大腸菌に発現させようとしたところ、完全長のタンパク質はほとんど発現されず、わずかに発現した完全長のタンパク質もほとんど可溶化されませんでした。

これは導入したＤＮＡにイントロンが含まれていたので、ＲＮＡスプライシングの機能を持っていない大腸菌では発現ができなかったというのが理由として考えられるのですが、
これ以外に発現しなかった理由として考えれるものがあったら教えてください。

No.2 ベストアンサー 回答者： ga111 回答日時： 2008/07/23 21:12

大腸菌での発現ではイントロンのないcDNAを使います。

イントロンはあってはなりません。

可溶化のテクニックはいろいろありますが、インクールジョンボディとか、可溶化、大腸菌　発現などで検索すると出てきます。原因は厳密には分からないが（蛋白の折りたたみの仕組みが細かくは分かっていないため）、異種蛋白発現ではよく起こり、普通の現象ということだと思います。

No.1 回答者： otx 回答日時： 2008/07/23 19:19

組み替えタンパク質を大腸菌に作られせる場合のトラブルは

ある意味いくらでもあります。

市販のプロトコールを見れば細かくトラブルシューティング等も書いてあるので、まずは参考にされてはいかがでしょうか。

http://www.yodosha.co.jp/book/9784897063690.html

http://www.yodosha.co.jp/book/9784897069180.html