大腸菌のグリセロールストックの作り方
学生です。大腸菌のグリセロールストックを以下の方法で作ろうと思っています。
1.大腸菌を一晩震盪培養
2.菌数が1×10^8/ml になったのを確認して、グリセロールが終濃度15%くらいになるように加える
3.液体窒素で瞬間凍結し、ー70℃保存
2.の菌数が1×10^8/ml になったのを、どのように確認すればいいのでしょうか?吸光度で判断すればいいのかなと思いましたが、どれくらいの吸光度であればいいのかがよく分かりません。
教えてください。よろしくお願いします。
No.2ベストアンサー
- 回答日時:
文献により、あるいは大腸菌の系統により、バリエーションがあるとおもいますが、一般的にいわれているのは(そして私が暗記して普段使っているのは)、A600=1で8x10^8 cells/mLだとおもいます。
>2.の菌数が1×10^8/ml になったのを、どのように確認すればいいのでしょうか
グリセロールストックを作るのに菌数を合わせる必要はなく、over-night cultureで十分に殖やした培養液を使えばいいです。それくらい培養すると、プラトー(それ以上菌数が殖えない状態)に達していて、A600=2~3くらいになると思います。
No.1
- 回答日時:
その辺にいくらでもあるプロトコールでは
むしろ、
吸光度で~になるように培養
とあると思いますが。
学生さん、どういう環境でストックを作ろうとしていらっしゃるのですか?
どうして指導教官や先輩に聞かないのか?
不思議でなりません。
ご回答ありがとうございます。
指導してくださっている先輩からいただいたプロトコールには書かれていなかった上に、先輩も分からないとのことで。それで、ネット等を使ってプロトコールを探している(吸光度が具体的に書いてあるような)つもりなのですが、、、力不足なのだと思います。もう少し調べてみます。
ありがとうございました。
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