酵母からTRIZOLを使ってtotal RNAを取ることになったのですが、
DEPC処理水の作りかたが分かりません。
一応、0.1%になるようにDEPC(Sigma)を分注後、2から3時間撹拌後、オートクレーブしました。DEPCの臭いが残ってると以後の実験に支障をきたすのでしょうか?

あと、first strandをギブコのSUPER SCRIPTを使って合成しようと思うのですが、RTを加えたあとの42度、50分でどのくらいの長さのfirst strandができるのでしょうか?
よろしくお願いします。

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A 回答 (1件)

DEPC処理水は多少臭いが残っていても大した影響はないと思います。


どうしても気になるのでしたら、もう1度オートクレーブにかける程度で
充分だと思いますが。
また、ファーストストランドの合成に関して、カタログでは45度、30分で
3.5kbまで増幅可能だとかいてますよね。
どれくらいの長さが必要なのかわかりませんが、3.5kbでは短い、または
念のためもっと長く合成するようにしたいということでしたら、同じくGIBCO
のエンゲロース酵素ミックスを併用することで9kbまで増幅できるように
なるようですので、そちらをご利用になってはいかがでしょうか?
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この回答へのお礼

ありがとうございました。
参考になりました。

お礼日時:2001/08/22 19:10

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リボースとデオキシリボースの構造の違いを見てください。
そこを変えると、保存性がぐっと上がった。
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でも、特にメッセンジャーRNAは対のRNA鎖ができても邪魔なだけでしょう。
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No.1さんに同じく
12連マイクロピペットで分注しても
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コンタミはしたことないです。

無菌操作ができている方なら
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