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免疫染色初心者です.よろしくお願いします.
血管内皮細胞,線維芽細胞,心筋細胞の特異的タンパクを染めるのに,Von Willbrand factor(rabbit),DDR2(rabbit),α-actinin,2次抗体としてgoat anti-rabbit IgG等の抗体を用います.こういう場合の1次・2次抗体の濃度はやはりある程度100倍,1000倍なり自分で希釈してみて決めるしかないのでしょうか?他の方の質問も拝見して,自分で調べるしかないのかなとは思いましたが,どの濃度で一番反応が出やすいというのはないのでしょうか.よろしくお願いいたします.
No.2ベストアンサー
- 回答日時:
なにしろ製造ロットによっても力価がばらつくし、抗原の量や濃度
によっても見えやすかったり見え難かったりなので、ある程度は自
分で決めてくしかないと思います。まぁ、とりあえず100倍くらいで
染めてみて、不満がなければそのままGo!ってのもアリでしょうね。
それか、DAKOあたりの「順番にかけるだけで、医者でも染められ
る」と豪語しているヤツを使うんですね。あそこはカタログに、推
奨希釈率を載せています。第VIII因子なら、50倍くらいで使えって
親切に書いてありますよ。とりあえずそれに従ってれば、大コケは
しません。本当はもっと薄くても染まるんですが。
ご返信ありがとうございます.
DAKOのHP行ってみました.
かなり詳しく載ってますね.
WAKOは知ってますが,DAKOは知りませんでした.
ありがとうございました.
No.1
- 回答日時:
抗体の親和性や、組織によってもシグナルの強度が変わるので、一概には言えません。
自分の場合は一次抗体200倍二次抗体500倍といった数値を目安としてましたが、こういった調整がうまくいかないと、シグナルが検出されなかったり、バックグラウンドが強くなりすぎたりするので、よく検討されるとよいと思います。もし、その抗体が人からもらったものならば、その人に適切な濃度を聞くとか、また購入したものなら、その抗体を用いた論文を参考にされてはいかがですか?お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
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