リアルタイムPCR コピー数のわかるテンプレートの作製について

あるサイトカイン遺伝子の発現をリアルタイムPCRを用いて定量しようとしています。検出系はSYBRを考えており、TaqManもSYBRが無理なら考えています。

現在プライマーを作製して、感度を調べている段階なのですが、スタンダードカーブがうまくひけずに困っています。

コピー数のわかっているテンプレートをスタンダードに用いるとよい、とおそわったのですが、その方法について若干判らないところがあるので質問させていただきます。

方法は、PCR産物をプラスミドに組み込み、その濃度、分子量等からコピー数を求めるということでしたが、
コピー数の求め方がよくわかりません。
考え方を教えていただけたければ幸いです。

No.1 ベストアンサー 回答者： pi3-kinase 回答日時： 2006/09/01 11:25

プラスミド濃度＝溶質量(プラスミドの重量）／溶液体積

溶質量＝プラスミドコピー数×プラスミド分子量
プラスミド濃度は濃度測定によって、プラスミド分子量は計算上
出ますので、コピー数を求めることができると思いますが・・・。

この回答へのお礼

ありがとうございます。
ごちゃごちゃと考えすぎてて、いたってシンプルなことに気づきませんでした。
もう少しよく考えてから投稿すべきでした。

お礼日時：2006/09/01 11:37