遺伝子のクローニング

ある遺伝子Ｘを発現させるためのプラスミドを作りたい場合、遺伝子Ｘの上流（プロモーター）と下流（ターミネーター）はそれぞれどの程度あれば（ＯＲＦと一緒にクローニングすれば）よいのでしょうか？遺伝子によって違うとは思うのですが、一般的にはどれぐらいなのか教えてください。

No.1 ベストアンサー 回答者： Dr_Hyper 回答日時： 2007/11/29 10:43

培養細胞に、ORF全長を強制発現するのであれば、cDNA全長（1st メチオニンからストップコドン）まであれば十分です。

一方、組織特異的な転写因子をゲノムごと細胞にいれても、その組織由来の細胞であってもちゃんと発現できない場合も多いと思います(キロ～メガbp）。
目的が強制発現(過剰発現、ectopic expression）であれば簡単ですが、ゲノムからの発現であれば、BacやYacといったベクターを用いた大がかりな実験になるとおもいます。
ご参考になれば幸いです。

この回答への補足

ご回答ありがとうございます。
具体的には、例えば、ＵＲＡ３マーカーのプラスミドがあったとします。このＵＲＡ３マーカーを他のマーカーに変えるべく、染色体（酵母）をテンプレートとしてマーカーとなる遺伝子をクローニングする場合、ＯＲＦだけで十分なのか、＋αで上流と下流が必要なのかということなのですが、どうでしょうか。

補足日時：2007/11/29 11:36