共焦点顕微鏡で植物組織(クロロフィル蛍光)
の観察をしています。
原理的には、切片が厚くても
任意の深度に焦点を合わせられる筈
だと思うのですが、
実際にやってみると、かなり薄い切片を
作らないと、きれいな画像が得られません。
これはどうしてなのでしょうか?

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A 回答 (4件)

補足です。


生試料で無ければならないのでしょうか?
固定処理をして、通常の脱水、キシレン、バルサム封入だけでも、透過性はかなり上がると思います。
クロロフィルの自家蛍光は残ると思いますよ。

一方、生でなければならない理由があるようでしたら、表面の情報のみを使うと割りきった方がいいかもしれません。厚切り切片であっても、落射型蛍光顕微鏡の特徴から、表面から数ミクロンまでであればきれいなデータは取れる可能性が高いと思います。どこまで行けるかは、Zセクショニングして検討してみてはどうでしょう。
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この回答へのお礼

補足回答ありがとうございました。
生でなくてはならない理由は、
(固定、脱水、封入したサンプルでも
 自家蛍光が残ることを知りませんでしたので)、
とにかくすぐにデータが欲しかったからです。。。
同時にTEM用のEPON包埋試料も作成して
おりますが、それでもクロロフィルの蛍光は
観察できるのでしょうか?

次回から、Zセクショニングで最表面のスキャンを
試みてみたいと思います。
ありがとうございました。

お礼日時:2005/04/24 10:29

#2です。

書き忘れたことがありました。
安息香酸ベンジルとベンジルアルコールを1:1の割合で混合したものは水と混ざりません。もしお使いになるのでしたら、バルサムなどで封入する時と同じ要領で、サンプルをエタノール脱水する必要があります。
また、脂溶性の高いものはこの溶液に溶け出してしまいます。もしかするとクロロフィルも溶け出してしまうかもしれません。
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この回答へのお礼

補足回答ありがとうございました。
参考にさせていただきます。

お礼日時:2005/04/24 10:22

厚手で透明ではないのサンプルの場合、レーザー光や励起されて生じた蛍光が乱反射で弱くなってしまうようです。

動物組織を免疫染色したものなどでは、安息香酸ベンジルとベンジルアルコールを1:1の割合で混合したものに浸けて透明度を上げてから観察していました。
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この回答へのお礼

とても参考になりました。
植物(針葉樹)の葉を輪切りにしたものを観察しているのですが、
透明ではないもので、かなり薄く切らないときれいな画像は得られません。
透過処理ができると良いのですが。

回答、ありがとうございました。

お礼日時:2005/04/21 22:30

共焦点でも厚手の試料場合、光の乱反射が原因になるかもしれません。

原理的には、データ採取は試料中を光が直進する場合を想定しています。しかしそうならない場合は、理論的によい像を得ることはできません。その場合は何らかの透過処理をする必要があると思います。

ただ、私自身、植物で厚手の生の資料を観察したことはありませんので、的はずれかもしれません。あしからず。。
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この回答へのお礼

光の乱反射が原因だったのですね。
生の植物のクロロフィル蛍光を観察しているので、透過処理はできないと思います。
やはり、きれいに薄切りにするしかないようですね。
回答、どうもありがとうございました。

お礼日時:2005/04/21 22:24

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>無菌室は持っていません
絶望に近いですよ。1部屋の壁や床をビニールシートで張って(床が木造では腐るので腐らないように適切な対応が必要).電気集塵機で0.1ミクロン以上の埃を除去して.1ミンロン以下の埃を除去するフィルターを吸気口につけて.(埃一つがばいちにつくと絶滅)。
ホルモン剤による薬害(皮膚炎をおこしたりする)を防ぐために.殺菌用ガスバーナーの排気のためにドラフト(局所排気装置)をつけて.
ぐらいやらないと。最低でも.日常生活の場所とは隔離した部屋を用意してください(薬品による中毒を防ぐため)。簡易ドラフトとしては.未熟児看護用の小屋が低価格です。

細菌培養の綿栓を作る練習だけはしてください。これが出来ないと埃が入って腐ってしまいますから。

ばいちの製造会社をお知らせします。会社のサイトからご近所の代理店を見つけてください。
和光純薬
関東化学

水用のフィルター会社です。水から細菌を除去するためのフィルターを使用します。代理店ではおそらく他の器材の販売をしていますので参考になるでしょう。
東洋ろ紙

参考図書としては.細菌培養の本が入門でしょう(麹や乳酸菌がなんといっても楽)。それと.内科か胸部外科の本を探して.結核病棟のホルマリンを使用した殺菌方法を探してください(厚生省の通達に合ったような気がします)。これは.雑菌が生育して培養が失敗した時に.室内全体を一括殺菌するために必須の方法です。植物培養のつもりが麹菌培養になったり.納豆培養・乳酸培養(培養が失敗した時に発生する菌はこの3種類が食品関係では多いです)になった時の対応として知っていないと困ります。

器材全般としてはご近所の理化学器材販売店を探してみてください。どなたかがこのサイトで本社のアドレスを記載しています。探してみてください。

私は.しんとう器購入と無菌室建設で挫折しました。

>無菌室は持っていません
絶望に近いですよ。1部屋の壁や床をビニールシートで張って(床が木造では腐るので腐らないように適切な対応が必要).電気集塵機で0.1ミクロン以上の埃を除去して.1ミンロン以下の埃を除去するフィルターを吸気口につけて.(埃一つがばいちにつくと絶滅)。
ホルモン剤による薬害(皮膚炎をおこしたりする)を防ぐために.殺菌用ガスバーナーの排気のためにドラフト(局所排気装置)をつけて.
ぐらいやらないと。最低でも.日常生活の場所とは隔離した部屋を用意してください...続きを読む

Q眼の焦点がぼやける?視界が狭くなる感じ

私はよくFPSといってPC画面の真ん中一点に意識を常に集中させる
ようなゲームを何年もやっているのですが、
特に最近、視野が狭くなったと感じます。

本を読んでも、つい半年前はある程度長い行、列を一度見で見ることが
出来たのですが、今では数行の文字しか捉えることが出来ません。

TVを見ていても、以前は右上や下にでるテロップとTVの画面を
同時?に見ることが出来たと思うのですが、今ではどちらかを意識して
見ないとハッキリと見ることが出来ません。

ここ数ヶ月あまり本を読まなかった事もあるかとは思うのですが、
これは眼の病気なのでしょうか?

やはりFPSのゲームが影響しているのでしょうか?

あと病気だとしたら、病院にいくべきでしょうか?
それとも眼の訓練なりで治るものでしょうか?

Aベストアンサー

こんばんは

目の痛みとかはないのですか?

ただ一度見てもらったほうがいいかもしれません
そのほうが安心ですしね
目の場合代わりはないので


ご参考までに

Q落射式蛍光顕微鏡について

素人の質問ですみませんが教えてください。ある所で不要になった落射式蛍光顕微鏡を譲り受けました。このような顕微鏡の特徴をまったくわからずにもらいました。本体は綺麗で問題ないのですが、問題はフィルターがなかったことです。この種の顕微鏡はフィルターがないとまったく使えないものでしょうか。説明書もなくてよくわからないのですが、小中学校のころに使った顕微鏡と同じような観察はできないのでしょうか。

Aベストアンサー

蛍光顕微鏡は、普通の光学顕微鏡に蛍光観察用のランプやフィルターキューブを組み込んだ物で、この後から付け加えられた部分を使わなければ光学顕微鏡と全く同じです。
蛍光顕微鏡には大抵ランプが2つ付いていて、1つは蛍光観察用の水銀ランプ、もう1つは普通の光学顕微鏡と同じハロゲンランプです。ハロゲンランプは顕微鏡本体の内部にあり、このランプがあれば光学顕微鏡として使用可能です。このランプの電源スイッチは顕微鏡本体に付いていると思います。
水銀ランプはだいたい顕微鏡の後部に付いています。おそらく顕微鏡本体とは別に電源ユニットが繋がっていて、電源ユニットにランプの使用時間を示すカウンターが付いていると思います。こちらは蛍光観察以外には全く使用しないので、点ける必要はありません。このランプは光が強すぎるので、仮に点灯できたとしてもフィルターの無い状態では目にとって危険です。おまけにかなり発熱しますので、うっかり触ると火傷します。電源が入らないようにしておいた方が無難でしょう。


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