![](http://oshiete.xgoo.jp/images/v2/pc/qa/question_title.png?e8efa67)
ちわっす!
答え魔ぽんたくんでっす♪
今日は困ったコトがあって、投稿しました。
DNAマーカー(λ/HindIII)を1%アガロースゲルで電気泳動してるんだけど、DNAが高分子の部分でスメア状のバンドを作って上手く分離できません!!
(DNAがすべて、高分子エリアにスメア状バンドとして集まってしまいます)
(T_T)
泳動バッファなどの試薬は調製済みのメーカー製プレミックス品を使っているので、試薬の組成は合ってます。
希釈率にもミスはありませんでした。
この場合、どのような原因が考えられますか?
<条件>
・泳動バッファ(TAEバッファ)
・ゲル(1×TAEバッファでアガロースを溶解した1%ゲル)
・電圧&時間(50v,90分)
・DNA量(100ng,10ng,3ng,1ng,300pg)
No.3ベストアンサー
- 回答日時:
3つ可能性をあげます。
1.lambda HindIIIではなく、未消化のlambda DNAを間違えて流した。
2.長期間冷蔵保存されていて、付着末端が水素結合を起こしている。Lambda末端のcos siteでこういう事が起こるのはご存じだと思いますが、ふつうの制限酵素末端でも起こることがあります。→泳動前に50-60℃で3-5分処理。
3.泳動サンプルはちゃんとバッファーされていますか?
ローディング「バッファー」はバッファー成分を含んでいないのがふつうで、しかもBPBなどで酸性になっていたりします。
制限酵素消化液などはバッファーされているのでそのまま加えて問題ないですが、バッファーされていないDNAの水溶液に加えると、DNAが変性したり移動度が変わるなど、おかしなことになります。泳動サンプルの希釈にはTEなどを使いましょう。
そういえば、乱暴にアプライしてもサンプルが溢れなかったような・・・・・
geneticist12さんの言うとおり、BPBが多すぎて酸性になってたのかも!
geneticist12さん、ありがとね!
(*^_^*)
BPBの量を減らして再トライしてみるよ。
No.2
- 回答日時:
何で検出しているのかわかりませんが、
EtBrでの検出でしたら、
λHindIIIトータルで10ng,3ng,1ng,300pgはバンドとして見ることができないのではないでしょうか。
スメア状になっているとしても3ngでぎりぎり、1ng以下は検出できないと思います。
もしどれのレーンも同じくらいのスメア状バンドとして見られているのならば、それはDNAではなくて何らかのごみだと思います。
ゲルが古いかアガロースの品質が悪いためにDNAが分離できていないのではないでしょうか。
ゲルが出来たてでないのでしたら、ウェルをよくピペッティングしてごみを除かないと同じような状態になることがあります。
もしくは間違えてアガーを使っていませんか?
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
似たような質問が見つかりました
- 生物学 大腸菌とプラスミド 1 2022/07/04 01:40
- 生物学 シャトルベクターの大腸菌への形質転換 1 2022/07/02 23:19
- 生物学 【 生基 DNAの複製 】 問題 窒素の同位体15N(窒素14Nより重い)のみを窒素源として含む培地 2 2022/10/08 16:33
- 工学 絶縁抵抗試験と耐電圧試験 3 2023/08/09 18:39
- その他(自然科学) 高分子 粘度 櫻田式について 1 2022/07/26 17:58
- 薬学 ブスルファンの作用機序に、「アルキル化によってDNAやタンパクの間に架橋を形成し、細胞分裂を阻害する 1 2022/04/04 17:20
- 水泳 水泳の後、腹痛になります。 自分は中学生でこの時期水泳の授業があるのですが、水泳の後、毎回お腹が痛く 2 2022/07/06 15:22
- Windows 10 Windows11でMP3 CDを作る方法 17 2022/10/17 19:17
- 魚類 治るだろうか… 1 2023/06/04 23:05
- 魚類 【至急】【金魚飼育】 対処法と原因、対策を教えて頂きたいです。 夜分遅くに失礼します。 金魚を先月末 2 2023/08/26 01:08
おすすめ情報
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
電気泳動によりDNAの分子量を求...
-
制限酵素地図の作成
-
電気泳動のスメアバンド
-
バンドの濃さから求めるDNAの量
-
DNA電気泳動で困ったことが起こ...
-
電気泳動写真からの濃度の求め方
-
アガロースゲル電気泳動でサン...
-
DNAを一晩、常温保存してしまい...
-
制限酵素地図の作成方法(すみま...
-
λDNAとはなんですか?
-
電気泳動のDNAバンドが出ないです
-
RNAの電気泳動について
-
DNAの電気泳動法による長さの測定
-
プラスミドの電気泳動
-
PCR法の結果のバンドで・・
-
dCAPsマーカーで遺伝子異変を検...
-
DNAの電気泳動の際に使うバッフ...
-
電気泳動
-
ImageJの使い方についてお教え...
-
プラスミド
おすすめ情報