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No.1
- 回答日時:
文献も何も、「Molecular Cloning」に出ていますよ(この手の仕事をしているところでこの本を置いていないはずない、、、、はず)。
アルカリ条件でDNAを一本鎖に解離した状態で電気泳動する方法です。
cDNA合成で、1st strandのサイズの検定をしたり、S1 mappingに使う一本鎖DNAプローブを精製するのに使ったりします。
簡単に説明すると、50 mM NaOH/1 mM EDTAの泳動バッファー(サンプル溶液、アガロースゲルもこの組成で)、泳動します。かなり熱が発生し(ときにゲルがとろけるほど)、電流もたくさん流れますので(ときにフューズが切れることも)、電圧は普段よりだいぶ低めにして、低温室でおこなうといいでしょう。また、アルカリ条件下でアガロースを加熱すると、加水分解してゲルの性能が悪くなります。まず、水に懸濁して溶かして冷ましてから10 x bufferを加えるとか、NaOHの代わりに同じ濃度のNaClで溶かしゲルを作ってから、泳動バッファーに浸けて平衡化してから使うとかします。
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