No.4ベストアンサー
- 回答日時:
薄青コロニーの現象は、実際にクローニングをしているとよく遭遇する現象で、実験の「こつ」のひとつともいえる現象です。
本来は、DNA断片が挿入されると、lacZ遺伝子が破壊されて、白色コロニーになるはずです。しかし、場合によっては、下流まで転写が進み、不完全な状態、且つ微量ながら、LacZ蛋白質ができてしまうことがあります。そうすると、真っ白ではなく、薄い青になってしまいます。
(挿入断片中にプロモーター活性がある場合、短い挿入断片で、中に終止コドンが無い場合などに起こります)
ただ、白色コロニーに、挿入DNAが入っていないプラスミドが入っていたというのは、あまり無い話です。薄青コロニーが当たりだったときには、白色コロニーは、プラスミドそのものが入っていないことが多いです。これは、プラスミド上の薬剤耐性遺伝子ではなく、宿主そのものが変異して、薬剤耐性を持ってしまった場合に起こることです。
もし、挿入断片が入っていないプラスミドが回収できたとすると、ライゲーションまでの間にプラスミドの切断部分に削り込みが起こってしまっていて、フレームシフトなどの変異が起こってしまった可能性が高そうです。
ちなみに、プラスミド上のlacZ遺伝子は、lacZ遺伝子の全長ではなく、N末側の一部分だけがのっています。これが転写・翻訳されると、宿主が持っているN末を欠いたlacZ遺伝子の産物とくっつくことによって、活性を持ったLacZ蛋白質となります。(alpha-complementationといいます)
No.8
- 回答日時:
酵素がHind3ですか。
予想はしていましたが。。。
おそらく挿入断片はλHind3マーカーだと思います。
他の班の挿入断片の大きさは0.6kbや2kbとか2.3kbもしくは4.4kbではないですか?
もしそうであればマーカーにある0.1kb程の断片が入ることがあります。
これは見にくい断片ですし、ゲルの端から出てしまった可能性も否めません。BPBより速く流れますから。
No.6
- 回答日時:
ただX-galだけをプレートに巻き込んで、
そこにトランスフォーマントをまいただけでは
正確なカラーセレクションできませんよ。
リプレッサーとIPTGはご存知でしょうか?
No.5
- 回答日時:
白コロニーから挿入断片のないプラスミドがとれたことについて
おそらく挿入断片が入っています。
ただ見えにくいだけです。
小さいからエチブロに薄く染まるので。
また、泳動するゲルの濃度がその大きさの断片の検出にあっていないのかもしれません。
小さすぎてBPBより速く流れてゲルの下端からゲル外に出たのかも。
多分ですが100ベース~200ベースくらいのものだと思います。
No.3
- 回答日時:
あまり遺伝子実験には詳しくないのですが、この実験はちょっとやったことがあるので、ご回答しようと思います。
白いコロニーから挿入したはずのDNAが確認できないのは、プラスミドDNAの回収やその後の操作でDNaseのコンタミが起こったのではないかと思います。学生実験ということですので、他の学生の結果がどうだったか聞いてみてはいかがでしょうか?おそらく白いコロニーからは目的のDNAが検出されているはずです。もし全員が全滅しているようであれば、実験の指導が悪いということですね(笑)
薄い青コロニーから断片が挿入されている、というのは、この実験の考察の肝になるところなので、あえてお答えしません。要は実験では教科書にあるとおりの理論だけの現象は起こらないということです。
No.2
- 回答日時:
学生実習でこんな実験するとも思えませんけど・・・。
学生の推理力を試しているのかな?
そういえば、私が受けた実習の中にはわざとベクターをコンタミさせて、学生の混乱を招く学生実習もありましたし。
普通に考えると逆ですよね。
でも結果から考えたら?
・白コロニー・・・lacZ遺伝子が働いてない。DNAなし。
・青コロニー・・・lacZ遺伝子が働いている。DNAあり。
白コロニーはlacZ遺伝子が働いていないので、遺伝子がない、もしくは破壊された。
DNAが入っていなかったことから、破壊されたのは除外。
ということは白コロニーはlacZ遺伝子を持っていない。
つまりlacZ欠損株の大腸菌を用いて、lacZ遺伝子を含むプラスミドを形質転換に用いた。
これだとDNAがはいっていないコロニーは白くなり、入っているコロニーは青くなります。
でも白コロニーからプラスミドは取れたんですよね?
私の推理はちょっと間違ってるかも。
青コロニーと比べてサイズ的にどうでした?
No.1
- 回答日時:
X‐galという酵素基質培地の酵素基質やlacZ遺伝子の働きが分かっている回答者がそう多くいるとは思えませんが。
(^^;もう少し、遺伝子の働きと、コロニーの色からどういう酵素を持っていることが分かるかを説明した上で、なんで疑問なのかを質問し直してみてはいかがでしょうか?
参考URL:http://www.eikenkizai.co.jp/product/baichi/escol …
この回答への補足
まずlacZ遺伝子がBガラクトシダーゼを作る。
Bガラクトシダーゼはラクトースを分解しガラクトースとグルコースにする。
同様にBガラクトシダーゼはX‐galをガラクトースと青い色素に分解する。
目的DNA断片をプラスミドのlacZ遺伝子内のマルチクローニングサイトに挿入する。(これによってlacZ遺伝子は破壊される。=Bガラクトシダーゼを作れない)
よって青いコロニーを形成したものはlacZ遺伝子を破壊されなかった(挿入されなかった)
白コロニーのものはlacZ遺伝子を破壊された(挿入された)はずなのに白で挿入されてなかったり、青で挿入されたものがあった。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
おすすめ情報
- ・漫画をレンタルでお得に読める!
- ・人生のプチ美学を教えてください!!
- ・10秒目をつむったら…
- ・あなたの習慣について教えてください!!
- ・牛、豚、鶏、どれか一つ食べられなくなるとしたら?
- ・【大喜利】【投稿~9/18】 おとぎ話『桃太郎』の知られざるエピソード
- ・街中で見かけて「グッときた人」の思い出
- ・「一気に最後まで読んだ」本、教えて下さい!
- ・幼稚園時代「何組」でしたか?
- ・激凹みから立ち直る方法
- ・1つだけ過去を変えられるとしたら?
- ・【あるあるbot連動企画】あるあるbotに投稿したけど採用されなかったあるある募集
- ・【あるあるbot連動企画】フォロワー20万人のアカウントであなたのあるあるを披露してみませんか?
- ・映画のエンドロール観る派?観ない派?
- ・海外旅行から帰ってきたら、まず何を食べる?
- ・誕生日にもらった意外なもの
- ・天使と悪魔選手権
- ・ちょっと先の未来クイズ第2問
- ・【大喜利】【投稿~9/7】 ロボットの住む世界で流行ってる罰ゲームとは?
- ・推しミネラルウォーターはありますか?
- ・都道府県穴埋めゲーム
- ・この人頭いいなと思ったエピソード
- ・準・究極の選択
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
妻が作る子供は、元彼たちとの...
-
摂食交配
-
なぜ 兄弟姉妹同士では 結婚で...
-
彼女が生でやらせてくれません...
-
どんなヤリマンでもしっかり結...
-
素朴な疑問です。 親子、兄弟、...
-
null mutantって?
-
なんで兄弟は同じ親から生まれ...
-
マスターキー遺伝子とホメオテ...
-
自分の血液型の遺伝子がAOなの...
-
うさぎとカンガルーは似ている...
-
DNAとRNAの違いについて
-
自家受粉と無性生殖
-
トランスポナーゼ遺伝子につい...
-
in transを日本語に直すとどう...
-
エチジウムブロマイド 発ガン...
-
+/+や-/-の意味がよく分かりま...
-
プラスミドバックボーンなどの...
-
flanking領域とは?
-
遺伝子の優勢劣勢
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
妻が作る子供は、元彼たちとの...
-
摂食交配
-
なぜ 兄弟姉妹同士では 結婚で...
-
彼女が生でやらせてくれません...
-
素朴な疑問です。 親子、兄弟、...
-
どんなヤリマンでもしっかり結...
-
ショウジョウバエの赤い液
-
うさぎとカンガルーは似ている...
-
最近の女子中高生って明らかに...
-
長男や長女は、遺伝子的に(頭...
-
結局は遺伝子。努力って基本無...
-
アダムとイブの2人が祖先ってこ...
-
ユズやスダチなど種から育てら...
-
近親相姦(姉ー弟)
-
三世代に1人、優秀な人が出て...
-
何故、B型はO型より少ないので...
-
DNAとRNAの違いについて
-
外国人に、金髪で青い目の方を...
-
null mutantって?
-
近親交配で、どこまで子孫を残...
おすすめ情報