PCRにおけるプライマーの作り方

ＰＣＲ反応において、例えば、5'末端からcactgtccttctgccatggcとgcaactagacgcagcccgcaとｍＲＮＡが並んでいて、これら二カ所をプライマーとして用いた場合二つのプライマーの塩基配列はどうなるのでしょう？？それぞれに相補的な塩基配列になるのでしょうか？？

No.1 ベストアンサー 回答者： kokichi 回答日時： 2004/08/21 11:24

質問文の意味がわからない部分もありますが、

5'-cactgtccttctgccatggc-3'　n×k　5'-gcaactagacgcagcccgca-3'の領域をPCRで増やしたい場合、設計すべきプライマーは
forward 5'-cactgtccttctgccatggc-3'
reverse 5'-tgcgggctgcgtctagttgc-3'
です。

それと、mRNAにtという配列は存在しません。

この回答へのお礼

ありがとうございました。
ｍRNA じゃなくて、ｃＤＮＡでした。
とんちんかんな質問に丁寧に答えてくださってありがとうございました。

お礼日時：2004/08/22 10:07

No.2 回答者： kokichi 回答日時： 2004/08/21 11:34

No1のものです。

下のプライマーでアニーリング温度を60℃でやれば大丈夫と思いますが、万全を期すならreverseのプライマーのTmを少し下げるよう工夫したほうがいいかもしれません。
ちなみに下のプライマーforwardのTm62.2、reverseのTm66.6です。