mRNA発現量を求める実験法

mRNA発現量を求める実験法で

ノーザンブロッティング以外のもので

ご存じの物があったら教えてください！
よろしくお願いします。

No.3 ベストアンサー 回答者： kshimo 回答日時： 2006/01/13 18:21

目的のｍRNAの発現量を観察する場合は

ほとんどの場合、いったんｃDNAに逆転写して
その後、そのRT-PCR産物を鋳型として
通常のPCRを行います。

肝心の目的物の量を測る方法はいくつかあるのですが
最も簡単なものはPCRがプラトーに達する前に
PCRを止め（20サイクル程度）電気泳動後
ゲル染色やサザンブロットによって
目的産物量を可視化、定量します。
ｍRNA量が多い＝鋳型量が多い＝同サイクル数なら
より強いシグナル
となるわけです。

もう一つの方法はリアルタイムPCRと呼ばれる方法で
検出試薬にサイバーグリーン（2本鎖のみが
検出される）を用いて1サイクル進むごとに
PCR産物量をシグナルから算出する方法です。
「ライトサイクラー」で検索すると
その機器がどういうものかわかると思います。
これを使って
「ある一定量にPCR産物が達するときのサイクル数」
を求めます。ｍRNA量が多い＝鋳型が多い＝より少ない
サイクル数で一定量に達する


ある細胞グループ内のｍRNA全般の動向を調べるなら
昔ながらのディファレンシャルデスプレイや最近なら
DNAチップ、マイクロアレイ、SAGEなどかな

この回答へのお礼

なるほど。わかりやすかったです！ありがとうございました！

お礼日時：2006/01/15 16:29

No.2 回答者： MIYD 回答日時： 2006/01/13 14:41

問題文を読んでも何をしたいのか良くわからないのですが、

mRNA全般を調べたいという意味ならば

銀染色(CLEAR STAIN Agなど)

長く流せばディファレンシャルディスプレイができます。

この回答へのお礼

レポートの課題でした。返答ありがとうございます！！

お礼日時：2006/01/15 16:23

No.1 回答者： popporu 回答日時： 2006/01/12 18:01

使えるならリアルタイムRT-PCRが一番よいのではないですか。

www.takara-bio.co.jp/prt/pdfs/prt4.pdf
それが無理なら半定量RT-PCRでしょう。

マイクロアレイとかSAGEでも一応調べられるとは思いますが、
多分今回の要望には沿わないでしょうか。