No.1ベストアンサー
- 回答日時:
使用する二次抗体によります。
例えば、マウスモノクローナル抗体による免疫沈降物を2-メルカプトエタノール/SDSの入ったサンプルバッファーでボイルしウェスタンブロッティングした際に、二次抗体として抗マウスIgG抗体を用いると50kDa程度、25kDa程度にバンドが検出されることがあります。
市販されている抗体にはこのような二次抗体が多く、これは還元条件下でのマウスIgGを認識していると言えます。
例えば、eBioscience社のTrueBlotという抗体は還元状態のIgGを認識しない二次抗体ですので、少なくともウェスタンブロッティングではこのようなIgGは認識されないことを売りにしております。私の方でも50kDaほどの免疫沈降物で困っていたのですが、この二次抗体を用いることで解決できました。抗体価はあまり高くありません。
(もし、免疫沈降で困っているようでしたら、後は免疫沈降する抗体をビーズに固定する方法も有効です)
参考URL:http://www.ebioscience.com/
この回答へのお礼
お礼日時:2005/03/02 09:21
ご使用情報を含めたご回答、ありがとうございます。
とても参考になりました。
還元状態のIgGを認識しないという区別はどこで出来るのか、eBioscience社の製品を確認してみたいと思います。
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