No.1
- 回答日時:
BPBの液が黄色くなるなら、1M Tris pH7.5など緩衝力のあるものを適当にいれてまず中和します。
そのあと棒状タイプ(なければバスタイプ)のソニケーターで攪拌するとかなり溶けます。それでも残るものは遠心して除いて諦めましょう。
この回答への補足
ソニーケーションはできるだけ避けたいです。
というのも、
TCA沈殿で、沈殿を一応溶かした液でタンパク定量を行うと
すべてのタンパクを回収できていない
(回収率30%くらい)
という結果があるので、この原因は
『TCA沈殿で、タンパクをちゃんと沈殿できていない』
『TCA沈殿で、沈殿を溶かしきれていない』
の2つにしぼりたいんで…
個人的に、
ソニーケーションをすれば、タンパクも切断されて
抗体との反応性が変わると思うんですが
No.2ベストアンサー
- 回答日時:
中和だけでもかなり違うでしょう。
また許容量以下のサンプルバッファーを加えるとなかなか溶けません。イエローチップの先で固まりを壊すといいでしょう。
ソニケーターで高分子量のDNAは壊れるが、一般には蛋白は壊れないとされています。これはBSAなどで(もしくはウエスタンでも)実験してみれば一目りょうぜんです。
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