培養細胞のギムザ染色のコツ

培養細胞のギムザ染色を行っていますが、
なかなか綺麗な染色を行うことができません。

現在は、培養液除去→PBS洗浄→すぐにメタノールで90秒固定→
　PBS洗浄→完全に乾燥→PBSで10倍希釈したギムザ、37度60分→洗浄
でやっています。

多くの参考資料を見ると、
「メタノール固定前に乾燥させる」との記載と、「なるべく乾燥させない」
と両方の記載があり、羊土社の文献にはエタノール固定なる方法が乗っています。

綺麗に培養細胞をギムザで染める際のコツはありますでしょうか？
またメタノール固定前の乾燥の是非はどうなんでしょう？
教えてください。

No.2 回答者： sevenless 回答日時： 2008/03/28 13:44

固定前にはＰＢＳで一度リンスしています。

この回答へのお礼

やはり、むしろ乾燥させない、ということですね？
ありがとうございました。

お礼日時：2008/03/28 13:50

No.1 回答者： sevenless 回答日時： 2008/03/28 12:40

Wako のギムザ液を使って添付のプロトコール通りやってますが、特に問題ないですよ。

http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/info/life/arti …

主要な違いとしては、
メタノール固定後乾燥しない
ギムザ液は水で希釈
染色は室温
といった点でしょうか。

色々な条件を試したわけではないので、これらの違いがどの程度影響するかは分かりません。

この回答へのお礼

早速ありがとうございます。
水で希釈した場合と、室温で染色というのは何度か試みたんですが、
固定後すぐギムザというのはやっていませんでした。
固定前の洗浄段階ではいかがでしょう？

お礼日時：2008/03/28 12:59