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ミトコンドリアの染色方法

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  • 質問者：gokaisei
  • 質問日時：
  • 回答数：2件

mito trackerでミトコンドリアが染色できるそうなのですが
本を読んでも原理がわかりません。mito trackerがどのような物質で
ミトコンドリアの中でどのように変化するか、なんでmito trackerがミトコンドリアに特異的に存在？できるのか。教えてください。
お願いします。

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A 回答 (2件)

No.2ベストアンサー

  • 回答者： cosmos-kt
  • 回答日時：

ミトコンドリアの内膜では、酸素呼吸系の電子伝達回路が働いています。

ここに、その還元型プローブを導入すると、ミトコンドリアの内膜では酸化されて一時的にとどまる性質を利用した蛍光プローブだと思います。

それも多分、シトクロム系の複合体辺りに作用するのではないかと思います。なぜならば、シトクロム系の場合には、電子伝達回路がクローズになっているので、とどまりやすいという性質があるためです。

つまり、その作用によって、酸素呼吸反応をしている細胞の中のミトコンドリアに選択的に働く蛍光色素であると思うのです。

参考：http://www.invitrogen.co.jp/products/molecularpr …
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No.1

  • 回答者： MIYD
  • 回答日時：

まずは、


http://host.cc.ntu.edu.tw/biotech/Confocal%20Hom …
を読んで、書かれていないことはメーカーに問い合わせてみましょう。
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１．大腸菌のサスペンションにアルカリ溶液を入れる
（大腸菌の膜が壊れて、タンパクやDNAなどが出てくる。DNAはアルカリで変性して一本鎖になる）

２．酸で中和する
（変性したタンパクなどは析出、長いゲノムDNAは中和で二本鎖に戻ろうするが、長いので絡まって析出。プラスミドDNAは小さいので二本鎖に戻って溶液中に存在）

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１．大腸菌のサスペンションにアルカリ溶液を入れる
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Q蛋白の分子量（kDa）を調べる方法

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NADH脱水素酵素（複合体I）の阻害剤
ロテノン、アミタール

シトクロムbc1複合体（複合体III）の阻害剤
アンチマイシンA

シトクロームオキシダーゼ（複合体IV）の阻害剤
シアン化合物、一酸化窒素

シアン耐性呼吸末端酸化酵素（AOX）の阻害剤
サリチルヒドロキム酸（SHAM）

ATP合成酵素（複合体V）の阻害剤
オリゴマイシン、DCCD（なんの略称？）、オーロベルチン

※電子伝達系ではマトリックス側から膜間腔へプロトンがくみ出され、その結果生ずるプロトン濃度勾配を利用して複合体VではATPを合成しています（プロトンのくみ出しと共役したATP合成）。このプロトン濃度勾配をうち消す働きをもつ脱共役剤も呼吸を阻害します。例をいくつか示します。
脱共役剤：ジニトロフェノール（DNP）、FCCP、CCCP、SF6847（最後の３つはなんの略かしりません）


もっとも有名なものはやはり青酸カリに代表されるシアン化合物だと思いますが、それによって阻害されない代替的な電子伝達経路の末端に位置する酵素がAOXと呼ばれるものです。いずれの阻害剤も呼吸代謝のメカニズムを調べる研究において重要な材料といえます。

参考URL：http://133.100.212.50/~bc1/Biochem/oxidphos.htm

NADH脱水素酵素（複合体I）の阻害剤
ロテノン、アミタール

シトクロムbc1複合体（複合体III）の阻害剤
アンチマイシンA

シトクロームオキシダーゼ（複合体IV）の阻害剤
シアン化合物、一酸化窒素

シアン耐性呼吸末端酸化酵素（AOX）の阻害剤
サリチルヒドロキム酸（SHAM）

ATP合成酵素（複合体V）の阻害剤
オリゴマイシン、DCCD（なんの略称？）、オーロベルチン

※電子伝達系ではマトリックス側から膜間腔へプロトンがくみ出され、その結果生ずるプロトン濃度勾配を利用して複合体VではATPを...続きを読む

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Q脱イオン水、MilliQ、蒸留水　の違いを教えて下さい

こんにちは。お世話になります。

バイオ、生化学系の実験に従事しているものですが「水」について教えて下さい。

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お互いの関係などありましたら（○○を～すると△△になる等）教えていただけると
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また、実験内容によってはエンドトキシンを気にする実験もありますが、エンドトキシンフリーの水を使う場合はどれを選べばよいのでしょうか？
動物細胞培養用に使う場合はどの水を選べばよいのでしょうか？

よろしくお願いいたします。

Aベストアンサー

pinokoBBさん、こんにちは。

バイオ・生化学関係に用いられる水は水道水をプレフィルターを通し、イオン交換・蒸留・逆浸透法、限外濾過などを複数回組み合わせて生成します。

プレフィルターは鉄さびや大き目のゴミを取り除くに用います。

イオン交換法は酸性・強アルカリ性の樹脂を通し、イオン化合物を除く方法でこれを行った水がイオン交換水（脱イオン水）です。水の純度の評価には比抵抗を用いますが、およそ数百ｋΩ・cmの水が得られます。この段階で除けるのはイオン化合物だけで有機物・微生物は除けません。

蒸留法は水を蒸留することで不純物を除く方法です。イオン交換法と組み合わせて2回蒸留することが一般的です。一般的な2次蒸留水の比抵抗は数MΩ・cmでバイオ・生化学関係には十分な純度です。動物培養細胞にも使用可能です。エンドトキシンも完全にフリーとまではいかないけれどもある程度の除去はできています。蒸留法は多くの不純物を除去可能ですが100度付近の沸点を持つ物質は除けません。

逆浸透法は半透膜に圧力をかけて精製する方法です。

限外濾過法は限外濾過膜を通す方法です。孔径は半透膜が数十nmに対し、限外濾過膜は数nmです。それゆえ、数kDa以上の分子であれば、限外濾過法で除けますので、エンドトキシンやRNaseなども除去できます。本当にエンドトキシンフリーな水が必要でしたら限外濾過法を行った水が必須です。ただ、普通のCOSとかHEKとかの動物細胞培養でしたら2次蒸留水でも十分です。蛍光検出用のマイクロアレイなんかは限外濾過水が必須なようです。

超純水は十数MΩ・cmの水のことです。MilliQはミリポア社の超純水装置を用いて作った水で比抵抗は15MΩ・cm以上と高純度の水です。MilliQに関してはイオン交換樹脂を通し、逆浸透法、限外濾過法を用いて精製しているようです。

＞また、実験内容によってはエンドトキシンを気にする実験もありますが、エンドトキシンフリーの水を使う場合はどれを選べばよいのでしょうか？
これに関しては上で書いたように限外濾過膜で精製した水です。MilliQが当てはまるでしょう。（超純水も一般的には限外濾過をしているのでこれも当てはまりますかね。）

＞動物細胞培養用に使う場合はどの水を選べばよいのでしょうか？
これは、2次蒸留水以上の純度があれば十分です。2次蒸留水、MilliQ水、超純水が使用できます。

ただ、水関係の装置は日頃のメンテナンスが重要でイオン交換樹脂とか水を貯めるタンク、蛇口に汚染がないかは確認する必要があります。

実験書には必ずはじめのほうに書いてあることですので、pinokoBBさん自身でなにか実験書をご参照ください。

pinokoBBさん、こんにちは。

バイオ・生化学関係に用いられる水は水道水をプレフィルターを通し、イオン交換・蒸留・逆浸透法、限外濾過などを複数回組み合わせて生成します。

プレフィルターは鉄さびや大き目のゴミを取り除くに用います。

イオン交換法は酸性・強アルカリ性の樹脂を通し、イオン化合物を除く方法でこれを行った水がイオン交換水（脱イオン水）です。水の純度の評価には比抵抗を用いますが、およそ数百ｋΩ・cmの水が得られます。この段階で除けるのはイオン化合物だけで有機物・微生物は...続きを読む

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Qエクセルで計算すると2.43E-19などと表示される。Ｅとは何ですか？

よろしくお願いします。
エクセルの回帰分析をすると有意水準で2.43E-19などと表示されますが
Ｅとは何でしょうか？

また、回帰分析の数字の意味が良く分からないのですが、
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回帰分析でＲ２（決定係数）しかみていないのですが
どうすれば回帰分析が分かるようになるのでしょうか？
本を読んだのですがいまいち難しくて分かりません。
教えてください。
よろしくお願いします。

Aベストアンサー

★回答
・最初に『回帰分析』をここで説明するのは少し大変なので『Ｅ』のみ説明します。
・回答者 No.1 ～ No.3 さんと同じく『指数表記』の『Ｅxponent』ですよ。
・『指数』って分かりますか？
・10→1.0E+1(1.0×10の1乗)→×10倍
・100→1.0E+2(1.0×10の2乗)→×100倍
・1000→1.0E+3(1.0×10の3乗)→×1000倍
・0.1→1.0E-1(1.0×1/10の1乗)→×1/10倍→÷10
・0.01→1.0E-2(1.0×1/10の2乗)→×1/100倍→÷100
・0.001→1.0E-3(1.0×1/10の3乗)→×1/1000倍→÷1000
・になります。ようするに 10 を n 乗すると元の数字になるための指数表記のことですよ。
・よって、『2.43E-19』とは？
　2.43×1/(10の19乗)で、
　2.43×1/10000000000000000000となり、
　2.43×0.0000000000000000001だから、
　0.000000000000000000243という数値を意味します。

補足:
・E+数値は 10、100、1000 という大きい数を表します。
・E-数値は 0.1、0.01、0.001 という小さい数を表します。
・数学では『2.43×10』の次に、小さい数字で上に『19』と表示します。→http://ja.wikipedia.org/wiki/%E6%8C%87%E6%95%B0%E8%A1%A8%E8%A8%98
・最後に『回帰分析』とは何？下の『参考URL』をどうぞ。→『数学』カテゴリで質問してみては？

参考URL：http://ja.wikipedia.org/wiki/%E5%9B%9E%E5%B8%B0%E5%88%86%E6%9E%90

★回答
・最初に『回帰分析』をここで説明するのは少し大変なので『Ｅ』のみ説明します。
・回答者 No.1 ～ No.3 さんと同じく『指数表記』の『Ｅxponent』ですよ。
・『指数』って分かりますか？
・10→1.0E+1(1.0×10の1乗)→×10倍
・100→1.0E+2(1.0×10の2乗)→×100倍
・1000→1.0E+3(1.0×10の3乗)→×1000倍
・0.1→1.0E-1(1.0×1/10の1乗)→×1/10倍→÷10
・0.01→1.0E-2(1.0×1/10の2乗)→×1/100倍→÷100
・0.001→1.0E-3(1.0×1/10の3乗)→×1/1000倍→÷1000
・になります。ようするに 10 を n 乗すると元の数字になるた...続きを読む

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