
基本的な質問で申し訳ありません。
現在、96wellプレートでHeLa細胞の増殖曲線を描こうとしています
最初の1,2日目は比較的きれいにはがれるのですが、その後日を経るにつれてはがれが悪くなってしまい、きれいにはがすことが出来ず、正確な数が測定出来ない状態です。
プロトコールとしては、培地を除去した後に、20μlの0.05%トリプシンを処理後、37℃で3分間インキュベートし、その後80μlの培地を入れてピペッティングを行うことではがしています。(ちなみに20μlではwell全体にいきわたっておらずそれも原因の一つかと考えております。)
もともとトータルの液量もあまり多くないため、全体をはがそうとして、ピペッティングの回数を増やしますと、泡だってしまうのでそれもどうにか避けたい状況です。
96wellプレートで、細胞の良いはがし方がありましたら教えていただけると光栄です。宜しくお願いいたします。
No.1ベストアンサー
- 回答日時:
>培地を除去した後に、20μlの0.05%トリプシンを処理後、37℃で3分間インキュベートし、
PBSで1度、もしくは2度洗ってみてください。インキュベートは10分くらいでもいいです。いずれにせよ、顕微鏡下で、完全にはがれていることを確認します。
>その後80μlの培地を入れてピペッティングを行うことではがしています。
PBSを代わりに入れてみてください。
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