細胞生物学の基本的な本を読んでいて疑問に感じた点について質問させて下さい。cDNAはmRNAから相補DNAを合成した後にアルカリ処理でRNAを除去し、1本鎖cDNAの3'末端がヘアピンループを形成してプライマーとして働くということが書いてあります。このヘアピンループ化はDNA一般に起こることなのでしょうか?もしそうだとするなら、PCRの際にプライマーを加えなくても、このループ部の3'末端を切断することができれば理論的には何らかの(ランダムな)増幅は起こりえるのでしょうか?
基本事項ですいませんが、時間のある方ぜひ教えて下さい。
No.1ベストアンサー
- 回答日時:
それは、オカヤマ-バーグ法という、超古典的な合成法ではないですか。
ヘアピンループのプライミングによるcDNA合成は効率が非常に悪いので現在はやりません。RNAを鋳型にファーストストランド合成の後、二本鎖特異的なRNAseであるRNAse Hで、DNA-RNAハイブリッドのRNAに切れ目を入れ、DNA polymerase IでRNA鎖をプライマーに、DNA鎖を鋳型にしてセカンドストランドの合成をするというのが現在一般的な方法です。DNA polymerase Iは合成方向にあるRNA鎖を分解しつつDNAを合成していくので、最終的にはすべてDNAに置き換わります(いわゆるnick translation 活性)。
まあ、そのうえで、、、
ループによるプライミングは効率は悪いけれども、あらゆるDNA合成酵素による反応で起こりえます。
たとえば、Klenow反応のとき、条件によっては(高反応温度など)、合成鎖がループバックして、自己鎖を鋳型にした反応がおこるなんていうことが、"Molecular Cloning"にも書いてあったと思います。
PCRでも、起こりうるでしょうが、過剰量に加えられているプライマーからの合成量に比べたらないも同然でしょうし、もしあったとしてもexponentialに増幅しないでしょうから、実際上、何の影響もないのでは。
わかりやすい説明ありがとうございました。教科書の例は過去のものだったのですね。RNaseHを使うとは勉強になりました。条件によるループバックの可能性も記載されているとは驚きました。本当にありがとうございました。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
似たような質問が見つかりました
- 生物学 mRNAとtRNAについて 1 2023/01/17 16:59
- 高校 生物の問題で下の塩基配列は、DNAを構成する2本のヌクレオチド鎖のうち、一方の塩基配列の一部を示した 2 2022/05/08 17:01
- 生物学 セントラルドグマの流れはこれであっていますでしょうか? DNAの遺伝情報がRNAポリメラーゼによって 2 2022/09/09 22:13
- 医学 新型 コロナワクチン 今回のP社、M社のワクチンはRNAで、AZ社にいたってはDNAです。あなたの設 7 2022/09/15 23:40
- 退職・失業・リストラ 派遣先の人間関係について 4 2022/05/29 07:02
- 生物学 DNAの末端に起こる問題を2つ教えてください。 また、DNAの末端の問題はどのような現象に関わるか、 1 2022/07/28 12:15
- Visual Basic(VBA) EXCEL VBA ユーザーフォームの内容をループでデータベースに登録したい。 2 2023/02/02 10:22
- C言語・C++・C# C 言語の Gauss Jordan 法について 2 2022/12/28 11:16
- 財務・会計・経理 社内精算口座に対する手数料発生について 1 2023/02/26 02:36
- Windows 10 windows10のクリーンインストールが完了出来ない 2 2022/06/04 13:33
おすすめ情報
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
DNA塩基配列から推定されるアミ...
-
遺伝子の塩基配列の問題がわか...
-
cos末端とは何ですか?DNAの端...
-
Shine-Dalgarno...
-
DNA
-
生化学に関して
-
短い配列のホモロジー検索
-
Primer3のLeftとRightの方向
-
突然変異(転座・逆位・欠失・...
-
DNAとRNAのどのような性質に違...
-
ニックトランスレーションについて
-
ハイブリダイゼーションとアニール
-
サザンブロット法って・・・?
-
HBVの「マイナス鎖」と「プラス...
-
系統樹の読み方について
-
PCR増幅産物のbp
-
PCRの 5’・3’ が分からず困っ...
-
長さNヌクレオチドのDNAで、幾...
-
塩基配列解析の仕方~波形の編...
-
プラスミドについて ご存知の...
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
DNA塩基配列から推定されるアミ...
-
生物の問題です。 「一本鎖切断...
-
系統樹の読み方について
-
Primer3のLeftとRightの方向
-
Poly(IC)とは
-
PCRの 5’・3’ が分からず困っ...
-
HBVの「マイナス鎖」と「プラス...
-
DNA
-
Shine-Dalgarno...
-
長さNヌクレオチドのDNAで、幾...
-
遺伝子操作
-
PCR
-
PCRプライマーへの制限酵素配列...
-
真核生物のコザック配列について
-
2つのシークエンスによる結果の...
-
DNA断片のシークエンス結果の読...
-
PCR増幅産物のbp
-
DNA
-
アリル特異的PCR法の原理を教え...
-
tRNA(運搬RNA)はどこで作られ...
おすすめ情報