吸光度とDNAの純度

260nmの吸光度/280nmの吸光度の比で、なぜDNAの純度が分かるのですか?
誰か教えてください。

No.3 ベストアンサー 回答者： 38endoh 回答日時： 2005/06/12 19:02

核酸やタンパク質に含まれている発色団の吸収極大波長を以下に示します。

核酸に含まれる発色団
　グアニン：248 nm
　アデニン：263 nm
　チミン：264 nm
　シトシン：274 nm

タンパク質に含まれる発色団
　フェニルアラニン：257 nm
　チロシン：275 nm
　トリプトファン：278 nm

大雑把に見て、核酸系の方が低波長にピークを持っていますね。ですから、低波長の吸収が核酸の濃度を示し、高波長の吸収がタンパク質の濃度を示す、ということが大雑把に分かります。

もしタンパク質にフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンなどが含まれていなければ、核酸とタンパク質との混合比などを議論することはできません。

この回答へのお礼

回答ありがとうございました。
とても詳しい解説をいただけたので、この問題について本質からしっかり理解できたように思います。
本当にありがとうございました。

お礼日時：2005/06/13 05:30

No.2 回答者： RabbitLand 回答日時： 2005/06/12 18:15

260nmでは核酸の濃度が、280nmではタンパク質の濃度がわかります。

純粋なDNAだとこの比が1.8に近いほど純度が高く、280nmの値が高ければその値は1.8よりも小さくなるのでコンタミしているということになります。

この回答へのお礼

回答ありがとうございました。
なぜ、A260とA280とで比較をするのかが分かりました。

お礼日時：2005/06/13 05:27

No.1 回答者： methyl 回答日時： 2005/06/12 18:02

DNAの吸収波長のピークが約A260だからです。

吸収スペクトルのグラフを描くとA260を頂点に山型のグラフになります。つまりA260/A280はA280の吸光度に対してA260の吸光度がどれほど大きいかを示し、純粋なDNAでは1.8～2.0程度と言われています。

この回答へのお礼

回答ありがとうございました。
A260という値の意味が分かりました！

お礼日時：2005/06/13 05:26