制限酵素の仕方

現在、プラスミドが50マイクロリットルの滅菌milliQ水に溶けていて、これを二つの制限酵素で切断しゲル抜きしたいのですが、制限酵素処理の反応系の量がよく分かっていません。
100マイクロリットルの系を作ろうと思っていて、以下のように量を出したのですがこれでいいのかどうか（特にbufferの量）教えてください。よろしくお願いします。

プラスミドが滅菌milliQ水に溶けているもの（TEは入っていない）：50マイクロリットル
EcoR1とXho1用の10×buffer：10マイクロリットル
制限酵素EcoR1：5マイクロリットル
制限酵素Xho1：5マイクロリットル
滅菌milliQ水：30マイクロリットル
合計：100マイクロリットル

No.1 ベストアンサー 回答者： mizu_atsu 回答日時： 2005/08/07 02:39

それであっていますよ。

ただ制限酵素が全体の10％というのは少し多い気がします。
ちょっとうるおぼえなのですが
溶液の10％が上限（多いとスター活性がでやすい）という話を聞いたことがあるので
酵素の割合を少し減らして反応時間を少し伸したほうがいいかもしれません。

この回答へのお礼

ありがとうございます。うまくいきました。

お礼日時：2005/09/01 15:31