![](http://oshiete.xgoo.jp/images/v2/pc/qa/question_title.png?e8efa67)
分子量約100kの蛋白質をHis-tagとの融合タンパク質として
大腸菌に作らせていますが、封入体に入ってしまっているようです。
ブロットオーバーレイ(ウエストウエスタン)のプローブとして使いたいと思っています。
機能不明なので、高次構造が大事かどうかも不明ですが、
ちゃんとしてるにこした事はないと思っています。
こうゆう場合、本などを見ると、
低温で培養してみる
GST等とのfusionに変えてみる
ドメインごとに発現させる
等のことが書いてありますが、下2つは結構大変ですよね。
以上のような可溶化条件の検討に努力を費やしたほうが良いのか
それとも、尿素やグアニジン塩酸のようなもので
強引に可溶化して、リフォールディングに努力を費やした方が良いのか
教えてください。
No.1ベストアンサー
- 回答日時:
大腸菌での発現はやってみないとわからない....
というのがホントのところだと思います。
お手軽でいいんですけどねぇ。。。
以下は回答ではなく私だったら....
という提案ですので参考までに。
分子量が100kということですので、フルで発現させると
可溶性画分で回収するのは難しいのではないかと感じます。
なので、尿素やグアニジン塩酸で可溶化して、
リフォールディングを行ないつつ、
低温での培養やドメインごとの発現を同時進行します。
もしかしたら、大腸菌以外の発現系だと
あっさりといくのかもしれませんね(笑)。
![](http://oshiete.xgoo.jp/images/v2/common/profile/M/noimageicon_setting_13.png?e8efa67)
No.2
- 回答日時:
100kDaを超えるタンパク質を大腸菌で作らせるのは大変ですよね。
僕ならば、
1.温度やIPTGの濃度を下げて、タンパク質合成の速度を落とす。
2.マイルドなプロモーターを使う。(pBADなど)
3.セルフリーの系を用いる。
PROTEIOS(Toyobo http://www.toyobo.co.jp/seihin/xr/product/protei …
RTS (Roche http://www.roche-applied-science.com/rts/)
Expressway (Invitrogen http://www.invitrogen.co.jp/jp_prdct/molecular_b …
などを考えます。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
似たような質問が見つかりました
- 生物学 大腸菌とプラスミド 1 2022/07/04 01:40
- 生物学 シャトルベクターの大腸菌への形質転換 1 2022/07/02 23:19
- 食べ物・食材 防腐剤としてのビタミンCについて ペットボトル飲料を買うと添加物の欄に『防腐剤としてビタミンC』と書 4 2022/09/02 12:17
- 化学 引火性物質の蒸気圧について 0 2023/02/16 20:19
- 化学 こんにちは、昨日もこのような質問を上げたんですが、 また知りたいことがあるので投稿いたします。 引火 1 2023/02/19 23:11
- K-POP 白石麻衣さんが成功者・勝ち組になれた理由は何だと思いますか? 4 2022/10/05 15:50
- 政治 統一教会自民党や創価学会公明党の本当の公約・マニフェストは、次のような内容で良い? 2 2022/06/25 07:23
- 生物学 腸内細菌をバイオテクノロジーで! 腸内細菌(フローラ)と免疫力との関係が指摘されてから久しく、相変わ 2 2022/07/17 09:04
- 政治 小泉自公政権になってからも、善政・善行は何一つ行わず、悪政・悪行・犯罪・テロ・噓八百等々 1 2022/06/02 18:22
- 政治 極悪犯罪反日売国テロカルト自民党や公明党や維新の会や国民民主や参政党に投票するのは墓穴を 1 2022/06/13 20:43
おすすめ情報
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
おすすめ情報