No.2ベストアンサー
- 回答日時:
2種類のDNAを混ぜて導入することをお勧めします。
この場合、例えば、totalで10まいくろグラムのDNAを加えたとします。
単純には5マイクログラム+5マイクログラムと混ぜて、totalのDNA量を
1種類の時と合わせるとOKです。
この時、それぞれの発現量を調節したい場合は
それぞれのDNAの量の比を変えることで調節できます(もちろんtotalの量は変えずに)。
私は同時に4種類のプラスミドを混ぜて発現させたこともあります。
2日連続で通常のプロトコールは、やめた方がいいです。
その理由は少なくとも2つあります。
1つ目は、そもそもトランスフェクションする前日にまいた細胞の量は
コンフルエントに近い状態です。そのときにうまくいくようにリポフェクタミンの
プロトコールは出来ています。
なので、2回目のトランスフェクションの時には際簿が増えすぎです。
2つ目は、リポフェクタミンの毒性は結構あります。また、トランスフェクションで
遺伝子を強制発現させるのは結構細胞にダメージがあるときがあります。
なので、2回目のトランスフェクションの後、結構な細胞が死んでしまう可能性が高いです。
No.1
- 回答日時:
2種類同時で構いません。
発現の比率をコントロールするにはプラスミドDNAの比率を変えます。このとき、合計が今まであるデータのうち最良のDNA量にします。発現に違いがありすぎるなどの都合により、1種類ずつ、2日連続で通常のプロトコールでも構いません。
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