No.2ベストアンサー
- 回答日時:
GFP-目的遺伝子-ルシフェラーゼ
と言う順番ですね。
ならば、まず、GFPのC末にマルチクローニングサイト(MCS)があるベクターを買います。論文などを見ると、クロンテック社のpEGFP-C1ベクターがよく使われていると思います。
そのMCSの一番下流の制限酵素サイト(もし、pEGFP-C1ならBamH1だったかな?)にルシフェラーゼ遺伝子をコドンがちゃんと合うようにクローニングします。もちろんルシフェラーゼにBamH1サイトがある場合は他の制限酵素サイトを使う必要がありますが、BamH1の切り口が同じBgl2を使うこともできます。両方が使えない場合は、他のサイトを使ってください。また、このときルシフェラーゼの開始コドンを含めないほうがいいと思います。終止コドンは個人の好みです。僕だったら、そのまま使います。
ルシフェラーゼの開始コドンを含めないのは、ルシフェラーゼがGFPとの融合蛋白質としてではなく単独で発現する可能性を除くためです。
上記で作ったベクターに目的遺伝子をクローニングすれば出来上がりです。目的遺伝子は少なくとも終止コドンを削る必要があります。僕は削りますが、なぜか開始コドンについては結構そのままつけている人が多いようです。
>さらに制限酵素サイトも入れたいのですが、配列をあまり変えずに導入する場合の気をつける点など教えてください。
と言うところがよく理解できないのですが、ORFの直前もしくは直後に制限酵素サイトを入れればいいのではないかと。
caaacgatgcatcaATGgctagctgtcaという配列なら
もし、開始コドンを削る場合は
caaacgatgcaGAATTCgctagctgtcaという風に
もし、開始コドンを削らない場合は
caaacgatGAATTCATGgctagctgtcaという風にします。
ただ、上記の例は制限酵素サイトとコドンが具体的には書けないので適当に書きました。
最後に、GFPからルシフェラーゼまで翻訳されることを確認した上で、プライマーを注文しましょう。
この回答へのお礼
お礼日時:2005/05/26 10:38
ありがとうございました。あまりプライマーを作ったことがないので、コドンをどうしたらいいのか、とても困っていました。単独で発現しないようにしたらいいんですね。無事設計することができたので、早速注文します。
No.1
- 回答日時:
GFP-目的遺伝子-ルシフェラーゼ
と言う順番ですね。
ならば、まず、GFPのC末にマルチクローニングサイト(MCS)があるベクターを買います。論文などを見ると、クロンテック社のpEGFP-C1ベクターがよく使われていると思います。
そのMCSの一番下流の制限酵素サイト(もし、pEGFP-C1ならBamH1だったかな?)にルシフェラーゼ遺伝子をコドンがちゃんと合うようにクローニングします。もちろんルシフェラーゼにBamH1サイトがある場合は他の制限酵素サイトを使う必要がありますが、BamH1の切り口が同じBgl2を使うこともできます。両方が使えない場合は、他のサイトを使ってください。また、このときルシフェラーゼの開始コドンを含めないほうがいいと思います。終止コドンは個人の好みです。僕だったら、そのまま使います。
ルシフェラーゼの開始コドンを含めないのは、ルシフェラーゼがGFPとの融合蛋白質としてではなく単独で発現する可能性を除くためです。
上記で作ったベクターに目的遺伝子をクローニングすれば出来上がりです。目的遺伝子は少なくとも終止コドンを削る必要があります。僕は削りますが、なぜか開始コドンについては結構そのままつけている人が多いようです。
>さらに制限酵素サイトも入れたいのですが、配列をあまり変えずに導入する場合の気をつける点など教えてください。
と言うところがよく理解できないのですが、それぞれの直前に制限酵素サイトを入れればいいのではないかと。
終止コドンたとえば、caaacgatgcatcaATGgctagctgtcaという配列ならcaaacgatgcaGAATTCgctagctgtcaという風にします。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
似たような質問が見つかりました
- 企画・マーケティング 女性をターゲットにしたお酒の開発・販売が遅れたのはどうしてだと思いますか? 1 2022/03/26 14:38
- アイドル・グラビアアイドル 政治家や60〜70代以降の男性が女性のことを卑下している人が多いのはどうしてですか? 3 2022/03/26 16:14
- その他(ニュース・社会制度・災害) 出生前診断や遺伝子検査については様々な意見がありますが、皆さんは賛成反対のどちらですか? 2 2022/04/10 19:48
- 医学 女性の飲酒の是非について 2 2022/03/26 16:40
- 大学・短大 女子大生(成人している大学2年以降の学生)の飲酒とリスクについて質問です。 5 2022/03/26 19:45
- 倫理・人権 法の下の平等という概念の必要性の有無についてどう思いますか? 4 2022/04/02 14:41
- 運転免許・教習所 酒気帯び運転違反(飲酒運転)について質問です。 5 2022/04/01 19:51
- 運転免許・教習所 酒気帯び運転違反(飲酒運転)について質問です。 6 2022/07/17 11:16
- 日本語 「酒が強い」・「酒が弱い」という日本語の使い方は間違っていると思います。 6 2022/06/14 18:27
- 生活習慣・嗜好品 お酒が強い体質の人はアルコール依存症になりやすいという話は事実ですか? 5 2022/03/26 18:35
おすすめ情報
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
DNA塩基配列の「相同性」?
-
転写、翻訳にかかる時間について
-
天孫降臨の神武天皇のY染色体の...
-
ゲノムDNAライブラリーとcDNAラ...
-
なぜDNAのT(チミン)に対応す...
-
lo hi intとは??
-
鬼滅の刃についてです ここで産...
-
クローニングとサブクローニン...
-
偽遺伝子とジャンクDNA
-
トランスポーターの親和性って...
-
iPS(induced pluripotent stem...
-
ポリシストロン性とモノシスト...
-
染色体歩行法
-
Oct3/4、Sox2、Klf4、c-Mycはど...
-
真核細胞と原核細胞のmRNAの違...
-
GFPのプライマーについて
-
遺伝子クローニングについて。
-
親の血液型で生まれる子供の血...
-
DNAとゲノムDNAの違い
-
プラスミドDNAのトランスフェク...
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
鬼滅の刃についてです ここで産...
-
Oct3/4、Sox2、Klf4、c-Mycはど...
-
親の血液型で生まれる子供の血...
-
DNA塩基配列の「相同性」?
-
ゲノムDNAライブラリーとcDNAラ...
-
転写調節領域、オペレーター、...
-
転写、翻訳にかかる時間について
-
controlとregulateの違いについて
-
真核細胞と原核細胞のmRNAの違...
-
複写と転写の相違点について
-
pUCベクターについて
-
大腸菌の野生株とDH5α株
-
DNAをボルテックス
-
ORF、オペロン、クラスターって...
-
ポリシストロン性とモノシスト...
-
遺伝 関連解析 F0、F1、F2
-
コザック配列の必要性
-
DNAとゲノムDNAの違い
-
ヒトゲノム計画について
-
なぜDNAのT(チミン)に対応す...
おすすめ情報