僕は大学の研究室でクリスマスローズという花の種特異的なDNAマーカーについて研究しています。その実験の過程で質問があります。
葉から抽出したDNAをオペロン社のプライマーOPA01~20までを用いて多型検索した結果いくつかの種特異的なバンドが得られました。それを大腸菌を用いてクローニングし、目的断片の確認のためコロニーPCRを行いましたが、その結果わずかながらサイズに差のあるバンドが数種類検出されたため、どのバンドが目的のものかを特定することができずに困っています。自分としては、大腸菌から直接OPAプライマーを用いてPCRを行えば、目的バンドがあればそれが増幅されるのではないかと考え、PCR組成、反応条件を変えて実験しています。しかしうまくいきません。もしこのような実験を経験したことがありましたら、PCR反応液の組成、反応条件などアドバイス下さい。その他にもなんかアドバイスありましたらぜひ頂きたいです。お願いします。
A 回答 (3件)
- 最新から表示
- 回答順に表示
No.3
- 回答日時:
状況がつかめないのですが、「いくつかの種特異的バンドをクローニングした」とありますが、
つまり、PCRによって何本かのバンドがでてきたそれらを丸ごとクローニングしたということですか?それともゲル抽出して、一本一本をクローニングしたのですか?
違うかもしれないですが、たとえば、PCRで得られたバンド一本をゲル抽出して、プローブ化し、コロニーPCR産物にサザンハイブリダイゼーションするとかはどうでしょう。めんどうかな。
No.2
- 回答日時:
#1です。
うっかり、文の一部を消してしまっていたみたいで、意味不明でしたね。訂正します。
最もありそうなのは、非特異的増幅が起こっていて、それをクローニングしてしまった可能性でしょう。インサートの末端だけでもシークエンスするのが一番だと思います。
No.1
- 回答日時:
目的のものがうまくクローニングされているとしたら、PCRで増えてこないということはまず無いと思います。
ゲノムから増幅できて、同じプライマーで大腸菌クローンから増幅できないというのは解せません。そもそも、サイズの異なるPCR産物が入り混じっているというのがあやしい。最もありそうなのは、非特異的増幅が起こっていて、それをクローニングしインサートの末端だけでもシークエンスするのが一番だと思います。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
似たような質問が見つかりました
- 生物学 シャトルベクターの大腸菌への形質転換 1 2022/07/02 23:19
- 生物学 大腸菌とプラスミド 1 2022/07/04 01:40
- その他(病気・怪我・症状) 新型コロナワクチン接種の繰り返しは免疫系を弱めガンのリスクが上がるという研究結果が出ました 陰謀論と 4 2023/06/04 07:43
- その他(教育・科学・学問) 大学学内における学生の夜間残留、寝泊りは大丈夫ですか 6 2022/10/21 10:25
- 戦争・テロ・デモ 岸田自公政権は緊急事態措置やまん延防止等重点措置も発動していないんですけどXBB.1.5 1 2023/01/17 17:09
- その他(悩み相談・人生相談) ポルノ画像を見た時の脳内の反応は男女間でほとんど差がない。男性の方が性欲が強い・・は嘘だった? 1 2022/08/22 19:28
- メディア・マスコミ 反ワクチンが言っていることは正しいことですか? 「PCR検査は拒否できるよ!」 「新型コロナワクチン 9 2022/07/21 23:42
- 生物学 化学の化学反応と、生物の進化論と同じですか? 4 2022/04/06 14:22
- 医療・安全 とうとう日本の医者らも動物実験でワクチンを打てば打つほど自然治癒力や免疫力も低下して 3 2022/08/09 19:02
- ハワイ・グアム 18歳以下ワクチン未接種の入国帰国について 2 2023/01/16 09:56
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
PCRとシークエンス反応
-
エキストラバンドがでる理由
-
転写反応には、どうしてプライ...
-
PCRで複数のバンドがでます。
-
DNA電気泳動について
-
RT-PCRのランダム,オリゴdTプ...
-
DNA複製について
-
DNAを室温で放置してしまい、DN...
-
質問です!
-
タンパク質の変性と酢
-
高校の生物実験から質問です
-
ルチンの加水分解(ケルセチンの...
-
親の血液型で生まれる子供の血...
-
塩基配列と塩基組成の違いはな...
-
アミノ酸のL型、D型の区別そ仕方
-
消化って異化ですか?同化ですか?
-
LD活性(lUL)= (0.0236/6.3×10^3...
-
タンパク質
-
マルターゼとグルコアミラーゼ
-
精液について
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
PCRの失敗について
-
PCRで複数のバンドがでます。
-
エキストラバンドがでる理由
-
PCRとシークエンス反応
-
PCRでバンドが2,3本出てしまい...
-
転写反応には、どうしてプライ...
-
PCR組成とDNAのスメア
-
PCRに関する計算
-
DNAを室温で放置してしまい、DN...
-
学生実験のPCRについて教えてく...
-
プライマーの劣化凍結融解について
-
DNA断片分析のPCR法で使うMaste...
-
RT-PCRのランダム,オリゴdTプ...
-
プライマーダイマーが出てしま...
-
アニーリングの温度設定について
-
mRNA発現量を求める実験法
-
定量性に欠けると言われるはな...
-
PCRでDNAが増幅されないのは・・
-
PCR プライマーの希釈
-
質問です!
おすすめ情報