ソモギー・ネルソン法について -ソモギー・ネルソン法でネルソン試薬を- 化学

Qソモギーネルソン法によるブドウ糖の定量について

生化学の実習にて、タイトルのような実験を行いました。
アルデヒド基を持つ糖は定量できるというのは分かったのですが、
定量できない糖を定量できるようにするには、どのような方法が考えられるのでしょうか？
結合によって、アルデヒド基がなくなるものは、
結合を切ればいい・・なんて、そんな簡単な考えではないですよね？

無知でお恥ずかしいのですが、
どうか、教えてください。お願いいたします。

Aベストアンサー

こんばんわ

＞グリコーゲンは非還元末端をもっているので定量できませんよね？

あぁぁ、ごめんなさい、わたしの書き方が悪かったです　m(_ _)m
ソモギ法は還元末端の数を数えるのようなものと書きましたので、
非還元末端の有無には関係がないのです。

ソモギ法は対象がわかっているときに簡便に定量をする方法で、
対象がわかっていない場合は還元末端の有無しか判定できません。

ですから、あまり現実的ではありませんがグリコーゲンもソモギ法で測定し
てみることはできます。この場合は測定サ...続きを読む

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Q【緊急】ソモギ法の滴定

還元糖の定量にソモギ法を用いています
最後にチオ硫酸ナトリウムで残存ヨウ素を滴定するのですが、指示薬のでんぷんの青紫色が消えて、滴定を終了させても、しばらくするとまた青紫色があらわれ、いつまでたっても滴定が終わりません。
なぜなのでしょうか、どうしたらよいのでしょう？

具体的な手順は、

サンプルの調整
　０．８M酢酸緩衝液に溶かしたデンプンをβアミラーゼとプルラナーゼで処理
　↓
熱湯処理で酵素失活
　↓
5倍に希釈しソモギ法へ

ソモギ法

試薬

Ａ　銅試薬
・硫酸銅８...続きを読む

Aベストアンサー

チオ硫酸ナトリウムで還元しているわけですから、空気中の酸素は、酸化剤として作用するハズです。

　私の場合は、過マンガンカリウム消費量を測定させていました。これは、還元剤としてシュウ酸を使い、過マンガン酸カリウムの消失まて滴定させますが、滴定終了後に、学生に「色がまたついた」と、放置している間に酸化されて色がつきました。

>Cu２Oの結晶が多いものほど
　酸化洞は、触媒ではないのですか。反応式を知らないので、なんともいえないのですが。金属の中で、銅、鉄、マンガンは、触媒に使われます。
　マンガンについては、酸素を水酸化マンガンと反応させ、マンガン酸の形にして、それをチオ硫酸ナトリウムで滴定したことはあります。この場合は、酸素量は、もろにマンガン酸の沈殿の量と比例していました。
　この測定法も、酸化剤をすべて酸化銅にするのでしょうか。それでも、放置後に紫色になることとは無関係です。

>どうしたらよいのでしょう？
テキストに「しばらく、無色の状態がつづくまで」のような記述があると想います。
　もうお分かりでしょうが、「しばらく」というところがキーで、長時間では色が元に戻る、ということです。普通は、3分程度でしょう。私は、1分で程度ですが。

　それからお気づきでしようが、滴定時に、攪拌が過ぎると、空気中の酸素と反応させていることになりますので。
　中和滴定の場合は、無意識に、空気中の二酸化炭素と反応させています。
>色が戻るものともどらないものがあります
　反応には、時間がかかります。瞬時には、反応しません。空気中の酸素と液体の反応ですから、激しく攪拌しないかぎり、接触面積が小さく、徐々にほんのり色がついていきます。
　チオ硫酸ナトリウムがほんの少し多いだけでも、色がつくまで反応するのは、時間を要します。

チオ硫酸ナトリウムで還元しているわけですから、空気中の酸素は、酸化剤として作用するハズです。

　私の場合は、過マンガンカリウム消費量を測定させていました。これは、還元剤としてシュウ酸を使い、過マンガン酸カリウムの消失まて滴定させますが、滴定終了後に、学生に「色がまたついた」と、放置している間に酸化されて色がつきました。

>Cu２Oの結晶が多いものほど
　酸化洞は、触媒ではないのですか。反応式を知らないので、なんともいえないのですが。金属の中で、銅、鉄、マンガンは、触媒に使...続きを読む

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Q吸光度の単位

吸光度の単位は何でしょうか!?
一般的には単位はつけていないように思われるのですが。。
宜しくお願いします。

Aベストアンサー

物理的には、No.1さんも書かれているように吸光度も透過度も基本的に同じ単位系の物理量どうしの「比」なので「無単位」です。しかし、無名数では他の物理量、特に透過度と区別が付かないので、透過度は"透過率"として「％」を付けて表し、"吸光度"は「Abs（アブス）」を付けて呼ぶのが業界（分析機器工業会？）のならわしです。

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Q肝臓１ｇあたりのグリコーゲン量を計算したいのですが・・・

肝臓１グラムあたりのグリコーゲン量を求めなければならないのですが
途中から分からなくて全く進まなくなってしまっています・・・。
肝臓1.01ｇから調整した液体（特に希釈などはありません）
のグリコーゲン量が9.7ｍｇ/ｍｌなのですが、
これをｍｇ/肝臓１ｇという単位に直すには
どのように計算すればよいのでしょうか？

また、肝臓グリコーゲンの正常値とはどれくらいでしょうか？
どこを探しても見つからなくて・・・

まとまらない文章で申し訳ないのですが、
助けていただけると嬉しいです。

Aベストアンサー

こんにちは．
肝臓1.01gから調製した液体は最終的に何mLになりましたか？
ここが不明では厳しいですが，ここがわかれば計算できますね．

肝臓グリコーゲン量の正常値についてですが，
動物種によっても違うと思いますので，補足されたほうがよろしいかとおもいます．

ラットであればお手伝い出来るかもしれません．
調べてみます．

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Qソモギ法の検量線

↓でもソモギ法について質問しているものですが、
今回はソモギ法の検量線について質問させて頂きます

マルトースを標準試薬にしたソモギ法の検量線はどんな線になりますか？

理論上（計算上）ではマルトース含量に反比例した
グラフになると思うのですが・・

また資料をWEBと図書館で探し回ったのですが、
ソモギ法の検量線の例が見当たりませんでした
もしWEBによい図例がございましたら
教えて下さいませ

Aベストアンサー

こんにちは

くわしいことはあまり覚えてないんですが、検量線はほぼ直線になると思います。ただしグルコースを標準にした場合とは傾きが違います。マルトースは分子量がグルコースの約２倍ですから、還元末端一個あたりの分子量もほぼ２倍になりますよね。

糖鎖が長くなるに連れて還元末端の比率は低くなりますが直線性はかわらないと思います。測定や考察のヒントになれば幸いです。

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Q還元糖ソモギ法の係数について

還元糖のグルコースをソモギ法で定量測定した場合、係数１．４４９と決まっているようですが、この係数はどのように出てきた数値でしょうか？また、測定原理や他の還元糖の係数はどうなっているのでしょうか？
お分かりになる方がいましたら、教えてください。
よろしくお願い致します。

Aベストアンサー

ソモジ-ネルソン法は還元糖の定量方法として古くからよく知られた方法ですが、原理は試薬中に存在する２価の銅が糖の還元力によってどれくらい還元されるか（１価の銅になるか）を測定するものです。ですから別に糖でなくても還元力のあるものならなんでも反応します。反応によって変化した青い色の吸収量はサンプル中の物質の還元力に比例しますので、吸収量からそのものの量（こ場合の糖の量）を定量することができるのです。
ここで言う係数の意味がちょっとわかりかねるのですが、おそらく吸収（ＯＤ）を濃度...続きを読む

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Q吸光光度法の検量線について

検量線を作成し、データーにばらつきが生じた場合はどのようにすべきなんでしょうか。無理やり線でつなぐのかなと思っているのですが・・回答をお願いします。

Aベストアンサー

　検量線を引くための標準液は、0を含めて、６点取っています。標準液を調製しやすいように、例えば、0、1、2、3、4、5 mg/mlなど。これを５点検量(0は、普通対照に利用するので)と称しています。４点の場合もあります。
　基本は、グラフを書いて、１点がヅレていたら、それは無視して検量線を引く。２点ズレテイタラ、こりはヒドイので、やり直す、と言うのが教科書です。

　正確にするために検量線を２連(2回)して、その平均を取る、というバカな教えをする教員もいますが(それなら、２連より１０連、１００連の方が正確、と毒づいています)。
　
　実験のテクニックが難しくて、全体がばらつく場合もあります。この場合は、５点ではなく、１０点とか、測定する回数を増やしたりして、信頼性を高めるしかありません。検量線は、もちろんパソコンで引きます。また、サンプルの測定も、一回だけではなく、数回測定して、平均値を去る必要があります。

　化学反応は、バラツキマセン。しかし、生物のサンプルは、個体差があるので、最低３回は測定して、平均と標準偏差を示します。例えば、血糖値を測定するときに、血液中のグルコースの測定は、ばらつかないので１回で十分。しかし、A、B、Cサンそれぞれの値は異なるので、ヒトの血糖値となると、最低３人は測定しなければなりません。
　同じサンプルを測定して、値がばらつくのは単に腕が悪いだけです。学生だと5%程度、慣れると2%以内、分析のプロだと0.5%の誤差でもウルサク言います。
データがばらつく原因を考え、検量線とサンプルの測定回数を決めてください。

>無理やり線でつなぐのかなと思っているのですが
測定した点をつないだりしているのでしょうか。それはヤリマセン。昔は、測定した点の近くをなるべく通る直線(場合によっては曲線)を、慣れを頼りに引いていました。今ではパソコンがあるので、回帰式を出します。これが検量線になります。最近は、機器に検量線を自動的に描き、濃度まで計算しているのが、普通です。
　回帰式の相関係数が、0.98以上あれば信頼していますが、0.95だとやり直すかどうか迷います。

　検量線を引くための標準液は、0を含めて、６点取っています。標準液を調製しやすいように、例えば、0、1、2、3、4、5 mg/mlなど。これを５点検量(0は、普通対照に利用するので)と称しています。４点の場合もあります。
　基本は、グラフを書いて、１点がヅレていたら、それは無視して検量線を引く。２点ズレテイタラ、こりはヒドイので、やり直す、と言うのが教科書です。

　正確にするために検量線を２連(2回)して、その平均を取る、というバカな教えをする教員もいますが(それなら、２連より１０連、１０...続きを読む

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Q分光光度計・吸光度とは？

ある液体の濃度測定をお願いしたところ、「分光光度計にて595nmにおける吸光度を測定する」と言われました。僕にはさっぱり意味が分からず、結果の数値を見ても人に説明できません。で、分光光度計とは？吸光度とは何でしょうか？何を測定したのでしょうか？まったくの無知なもので、よろしくお願いします。

Aベストアンサー

　分光光度計とは、光源から出た光を波長ごとに分ける部分（分光部）と、分けた光を試料に当てて光の弱くなる程度を測定する部分（光度計）からなります。
　試料に当てる光の強さをＸとし、試料を通過した後の光の強さをＹとすると、
　まず、透過率を求めます。透過率・・・Ｔ(％)＝Ｘ／Ｙ×１００
　もっとも、普通に光度計で則って居する場合、純水などをいれた空セルで１００％合わせをして、次にセル内を試料に入れ替えて測定するので、透過率は装置に表示され、計算する必要はありません。
　次に、この透過率から吸光度を求めます。
　吸光度＝－log（Ｔ／１００）
　なぜ吸光度を計算するかと言うと、溶液中の光を吸収する成分の濃度が吸光度と比例するからです。
　予め濃度の分かった標準試料を用いて、濃度と吸光度の関係を求めて「検量線」を作っておき、その他試料の吸光度を測定する事で濃度が求められます。

　測定する色調により波長は変わります。
　検量線作成に先立って、標準試料の場合の吸収スペクトル（広い波長範囲にわたり、波長と光の吸収度の関係をグラフ化したもの）を採り、測定上最適な波長を決めます。
　普通は、光の吸収の一番大きい波長を選びますが、その他条件も加味して決定する必要は有ります。
　５９５nmは可視光線のやや長目の波長です。

　なお、＃２さんの提示されている「Lanbert-Beerの法則」（ランバート・ベールのほうそく）は基本的かつ重要で有名な法則です。

　Ｐ．Ｓ吸光度の計算例
　透過率＝８５.３％だとすると、
　吸光度＝－log（８５.３／１００）＝０.０６９
　（昨今の分光光度計は吸光度も自動表示されるので、いちいち計算する必要は無いのですが、原理を知っている事は大切です）
　
　

　分光光度計とは、光源から出た光を波長ごとに分ける部分（分光部）と、分けた光を試料に当てて光の弱くなる程度を測定する部分（光度計）からなります。
　試料に当てる光の強さをＸとし、試料を通過した後の光の強さをＹとすると、
　まず、透過率を求めます。透過率・・・Ｔ(％)＝Ｘ／Ｙ×１００
　もっとも、普通に光度計で則って居する場合、純水などをいれた空セルで１００％合わせをして、次にセル内を試料に入れ替えて測定するので、透過率は装置に表示され、計算する必要はありません。
　次に、この...続きを読む

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Q教えて！

ショ糖の場合このように加水分解して還元糖量を求め、それに０．９５を乗じてその量とする。これらの数値の根拠とは何なんでしょうか？

Aベストアンサー

　＃１さんの言われる通りですが、ここでは、単純に加水分解前後の重量変化として考えてみます。

　ショ糖（Ｃ12Ｈ22Ｏ11）の分子量＝３４２
　加水分解した各々、ブドウ糖も果糖も同じ（Ｃ6Ｈ12Ｏ6）分子量＝１８０なので、２つ合わせて３６０
　つまり、３４２ｇのショ糖を加水分解して３６０ｇの還元糖が得られるので、還元糖から元のショ糖の量を計算すると、３４２／３６０＝０.９５の換算係数となります。
　　

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Qグルコースとグリコーゲンの違いは何ですか？

グルコースとグリコーゲンの違いはあるのでしょうか？私は糖が血液にいる間はグルコースで、糖が筋に入るとグリコーゲンに変わるという解釈をしています。具体的な違いを教えて頂ければ幸いです。

Aベストアンサー

植物は光合成などによりグルコースを合成しますが、人間や動物はグルコースの形のままで体内に貯蓄される事はほとんどありません。グルコースのままではかさばるからだと思います。たいていは脂肪や、筋肉や肝臓に貯えられるグリコーゲンの形で存在します。グルコースは糖を構成する基本的な単位であり、グルコースが何個もつながったものがグリコーゲンです。グリコーゲンはグルコースが何個も連なり、更に枝分かれして、大変貯蓄に適した形となっています。
糖をエネルギーに変える反応には、無酸素時に糖を分...続きを読む

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