A 回答 (2件)
- 最新から表示
- 回答順に表示
No.1
- 回答日時:
ミュータントとワイルドタイプではすでに違うと思うのでその検討の意味がよくわかりませんが・・・
私なら変異体でやってみますけどね。
とりあえず界面活性剤は試しましたか?tritonX100などは大腸菌と相性が良いようです。
巻き戻しを考えているなら、グアニジン塩酸(もしくは尿素)を使うのが早いと思います。
ちなみに、変異体で急に発現が良くなったりはしていませんか、発現量が多くて不溶化するときは、発現量を調節する事で改善もできますけど。
No.2
- 回答日時:
タンパク質精製などを日常おこなっています。
>野生型不溶性画分を何回も超音波破砕処理し、SDS-PAGEで単一なバンドを得たいのですが
というのは、どういうことでしょうか?
単一なバンドを得たいと言うことは、「大腸菌のタンパク質と混ざった状態から、発現させたものだけを単離したい」ということだと考えてよろしいでしょうか。
具体的な操作が見えていないので、見当違いかも知れませんが・・・。
本来、超音波破砕を繰り返しても、ほしい物だけを単離するのは難しいと思います。
不溶性タンパク質のrefoldingの一般的な方法としては、沈澱したタンパク質をグアニジンや尿素入りのBufferで溶かしてから、透析などで変性剤を取り除きます。完全に変性剤がない状態でもタンパク質が沈澱しなければ、とりあえずrefoldingは成功と考えます。
この状態では、まだ大腸菌由来のタンパク質との混合物なので、この後で、アフィニティカラムやイオン交換等の方法で、ほしいものだけを単離してきます。
また、His-tagつきタンパク質などでは、タンパク質を変性させた状態でアフィニティカラムで精製し、ほしいものを単離してから、refoldingを行うという方法もあります。
refoldingの条件(変性剤を取り除く時のBufferの組成など)、タンパク質の単離の方法は、ものによって違うので、結局は試してみるしかありません。
また、No.1の方も言われているように、野生型では溶けるものが、変異体では溶けないということは、この2つは性質がかなり違うと思われます。この場合、野生型の不溶性画分でrefoldingの条件を決めたとしても、変異体で同じ方法が使えない可能性が高いです。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
おすすめ情報
- ・漫画をレンタルでお得に読める!
- ・人生のプチ美学を教えてください!!
- ・10秒目をつむったら…
- ・あなたの習慣について教えてください!!
- ・牛、豚、鶏、どれか一つ食べられなくなるとしたら?
- ・【大喜利】【投稿~9/18】 おとぎ話『桃太郎』の知られざるエピソード
- ・街中で見かけて「グッときた人」の思い出
- ・「一気に最後まで読んだ」本、教えて下さい!
- ・幼稚園時代「何組」でしたか?
- ・激凹みから立ち直る方法
- ・1つだけ過去を変えられるとしたら?
- ・【あるあるbot連動企画】あるあるbotに投稿したけど採用されなかったあるある募集
- ・【あるあるbot連動企画】フォロワー20万人のアカウントであなたのあるあるを披露してみませんか?
- ・映画のエンドロール観る派?観ない派?
- ・海外旅行から帰ってきたら、まず何を食べる?
- ・誕生日にもらった意外なもの
- ・天使と悪魔選手権
- ・ちょっと先の未来クイズ第2問
- ・【大喜利】【投稿~9/7】 ロボットの住む世界で流行ってる罰ゲームとは?
- ・推しミネラルウォーターはありますか?
- ・都道府県穴埋めゲーム
- ・この人頭いいなと思ったエピソード
- ・準・究極の選択
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
生理食塩水のNa濃度が血清Na濃...
-
DNAとたんぱく質の違い
-
精液について
-
ヒトの遺伝子は22000だがタンパ...
-
酵素 分子活性Kcatの算出方法
-
タンパクの精製をバッチ法で行...
-
SDS-PAGEで濃縮ゲルがタンパク...
-
タンパク質の略号(?)を教え...
-
プロテオミクスの必要性
-
ウェスタンブロットでバンドが...
-
タンパク質実験について
-
醗酵乳
-
ルチンの加水分解(ケルセチンの...
-
学位論文の再現性がない時の処分
-
DNAって何通りあるんでしょうか?
-
親の血液型で生まれる子供の血...
-
DNA塩基配列から推定されるアミ...
-
【 生基 DNAの複製 】 問題 窒...
-
生物基礎の質問
-
制限酵素地図の作成
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
精液について
-
タンパク質の凝固
-
米に変わる主食とするなら何に...
-
酵素 分子活性Kcatの算出方法
-
タンパク質をボルテックスできるか
-
150KDa~200KDaの範囲のたんぱ...
-
遺伝子の分野で「コード」って...
-
「カルノア液」について教えて...
-
電子レンジでタンパク質が毒に...
-
タンパク質は大きく分けて膜タ...
-
卵白アルブミン=オボアルブミ...
-
同じタンパク質なのに分子量が...
-
オクラはなぜねばねばするよう...
-
食器のタンパク質汚れは水のほ...
-
タンパク質ってボルテックスし...
-
たんぱく質の吸光係数(紫外線...
-
タンパク質
-
電気泳動 SDSの熱処理について
-
mRNAレベルとタンパク質レベル...
-
RNA抽出について
おすすめ情報