ビタミンCの分析方法

食品中の総アスコルビン酸の定量を、HPLC法でやっています。インドフェノールで還元型を定量しています。しかし、表示してある量よりも、多い結果となってしまいます。
HPLCの条件は
カラム：C18
流速：1.0ml/min
移動相：酢酸エチル：ヘキサン：酢酸（5：4：1）
カラム温度：40℃
です。この条件だと、検出時間が2分ちょっとで、早過ぎるのが問題かと思うのですが。。。
カラムの選択がよくないのでしょうか？
本を見るとシリカと書いてあったので、これを選んだのですが。。。

No.2 ベストアンサー 回答者： loveobo 回答日時： 2002/06/14 02:45

C18（ODS）は典型的な逆相用カラム、お書きの移動層は順相用組成と

お見受けしますが、いかがでしょうか？
参考ＵＲＬは、#1の方のご紹介とは別のメーカーさんのサイトで、
順相と逆相の違いが平易に説明されているようです。
もし文字化けしたら、ブラウザの表示メニューで文字コードを
シフトJIS に設定してみて下さい。

参考URL：http://www.sdk.co.jp/shodex/japanese/kouzac.htm

この回答へのお礼

ありがとうございました。すごくわかりやすい図があったので、これを参考にカラムを検討したいと思います。
やはり、カラムの選択がまずかったようです。。。

お礼日時：2002/06/14 09:04

No.3 回答者： rei00 回答日時： 2002/06/14 13:02

　疑問は解決したようにも思われますが，チョット気になったものですから補足を。

> すごくわかりやすい図があったので、これを参考にカラム
> を検討したいと思います。
> やはり、カラムの選択がまずかったようです。。。

　お書きの分析の条件は文献等で調べたものではないのでしょうか？　アスコルビン酸（ビタミンＣ）のＨＰＬＣ分析の条件は沢山報告があると思います。例えば次のもの。

「HPLCによる果実,野菜中の総アスコルビン酸の定量」
　食品総合研究所研究報告，52号，p. 30-35 (1988-3)
　参考 URL のサイトで PDF ファイルが見れます。

　また，ＨＰＬＣカラムを販売しているメーカーでは分析例を持っていると思います。例えば，loveobo さんが紹介されている「Shodex」のサイトには，「血中のアスコルビン酸と尿酸」，「脳脊髄液中のアスコルビン酸と尿酸」，「尿中のアスコルビン酸」の分析例があります。

　「loveobo さんの参考 URL ページ」→「Ｓｈｏｄｅｘホームページ目次へ」→「カタログデータ集　応用データ集」→「5. ビタミン・ホルモン・脂質」→「2. ビタミン」と進んで下さい。

　これらで見ると，逆相カラムでリン酸バッファーで溶出しているようですが・・・。

参考URL：http://rms2.agsearch.agropedia.affrc.go.jp/conte …

この回答へのお礼

回答、ありがとうございました。私もいろんなページを見たんですが、ほとんどが逆相カラムでリン酸バッファーを使っていました。しかし、今回は食品衛生法に従ってやってみようと思い、順相でやってみようと思います。
早速、昨日カラムをかえてやってみたところ、うまくいきそうな感じです。
このまま、うまくいってくれるといいんですが。。。

お礼日時：2002/06/15 11:14

No.1 回答者： o-ae 回答日時： 2002/06/13 23:12

一度下記ＨＰで検索してみてください

２分の保持時間は短いと思います。
あと、波形処理は正しくされて知るのでしょうか
ベースラインを書かせて確認してみてはいかがでしょうか。

参考URL：http://www.an.shimadzu.co.jp/support/solunavi/so …

この回答へのお礼

おそくなりましたが、回答ありがとうございました。
やはり、2分は早過ぎですよね。。。

お礼日時：2002/06/15 11:09