分光高度計のブランク合わせで分からないことがあります。

締切済

質問者：miu42yu
質問日時：2008/10/20 14:32
回答数：2件

初学者です。どうかよろしくお願いいたします。
分光高度計でのブランク（透過率100％）合わせが波長を変えるごとに必要な理由を教えて下さい。

通報する

この質問への回答は締め切られました。

質問の本文を隠す

回答 (2件)

最新から表示
回答順に表示

No.2

回答者： elpkc
回答日時：2008/10/20 15:14

測定する溶媒が波長ごとに微妙に透過率が異なるためです。

ある波長で100%を合わせて、スキャンしてみてください。
100%の値が変動すると思われます。
したがって、波長ごとに100%のブランク合わせが必要です。

ベースライン補正が出来る機種では、スキャンして各波長ごとに100%補正しますので、その場合は不要となりますが、正確に測定する場合は、それでも、波長ごとにあわせる必要があります。

- 0
- 件

通報する

この回答へのお礼

とても早くに回答ありがとうございます。
非常に納得しました。ありがとうございました。

通報する

お礼日時：2008/10/20 15:33

No.1

回答者： doc_sunday
回答日時：2008/10/20 15:05

これは装置によって異なります。

多分単一光路の分光「光度計」を用いておられるのではないでしょうか。
それも、コンピュータ記憶式でない装置。
二光路の分光光度計や記憶式の装置ですとブランクは自動的に差し引かれるので波長毎に合わせる事はしないと思います。

- 0
- 件

通報する

この回答へのお礼

こんなにも早く回答ありがとうございます。
もう一度使用した装置を確認しようと思います。

通報する

お礼日時：2008/10/20 15:26

お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう！

質問する（無料）

このQ&Aを見た人はこんなQ&Aも見ています

専門家回答数ランキング

専門家

※過去一週間分の回答数ランキングです。

質問する（無料）

他の専門家の回答をチェック

このQ&Aを見た人が検索しているワード

このQ&Aと関連する良く見られている質問

Q分光光度計での測定手順

分光光度計である溶液の濃度を測定しています。
人によって二つのやり方があることが分かり、どちらが正しいかを検討しています。
ちなみにダブルビームです。
（方法１）
・キュベットＡとＢに水を入れてゼロ補正
・次にキュベットＡにブランク、キュベットＢにサンプルを入れて吸光度の差を測定する。
（方法２）
・キュベットＡに水、キュベットＢにブランクを入れてゼロ補正
・次にキュベットＡに水、キュベットＢにサンプルを入れて測定。
・ブランクとサンプルのそれぞれの吸光度の差を計算する。

どちらでも良いという人と、差があるようだという人と分かれています。どなたか教えてください。

Aベストアンサー

以前、分光光度計の設計をやっていました（早い話、作る方のプロでした）。

操作上のミスや誤差を抜きにして言えば、装置的には優位な誤差に違いは
ないように思いますが、分光光度計の設計者が想定している使用方法は、
きっと（方法１）ですね（ひょっとして私だけだったらごめんなさい）。

関係しそうなポイントをいくつか挙げておきます。

１．ゼロ補正は、再現可能性の高いものを基準として実施した方が良い。
　　つまり、今日も明日も明後日も、特別なアクセサリを使用せず、
　　いつものキ...続きを読む

他の回答も見る

Qブランク値って・・・

吸光光度法のブランク値ってなんですか？

Aベストアンサー

ブランク（blank）＝空白。
測定したい溶質を含まない溶媒だけを分光光度計のセルに入れて測定し、
検量線のゼロ点にあたる値を測ります。これがブランク値です。
これにより、妨害物質や使用セルの光路長に由来する誤差の影響を
排除することができます。

他の回答も見る

Q吸光度の単位

吸光度の単位は何でしょうか!?
一般的には単位はつけていないように思われるのですが。。
宜しくお願いします。

Aベストアンサー

物理的には、No.1さんも書かれているように吸光度も透過度も基本的に同じ単位系の物理量どうしの「比」なので「無単位」です。しかし、無名数では他の物理量、特に透過度と区別が付かないので、透過度は"透過率"として「％」を付けて表し、"吸光度"は「Abs（アブス）」を付けて呼ぶのが業界（分析機器工業会？）のならわしです。

他の回答も見る

Q吸光度と透過率

　早速質問させていただきたいのですが、吸光度と透過率にはどのような関係があるのでしょうか？ランベルトベールの法則を利用すると言うのはわかるのですが、吸光度は透過度の逆対数であると理解しているのですが、どう関係しているか分かりません。教えてください。

Aベストアンサー

私も時々分らなくなることがあります。苦手のひとつですね。分光計で考える良いと思います。試料溶液と溶媒単独を同じ光源からのそれぞれ通過させ、溶媒単独と通過してきた光の強さ（光電管の電圧）Ｉ0　と試料溶液を通過してきた光の強さ（光電管の電圧）Ｉとして、縦軸に光学密度（吸光度とも称されます）ｌｏｇ（Ｉ0／Ｉ）又は透過率（Ｉ／Ｉ0）、横軸に波長又は波数のチャートが得られます。それ故、吸光度は透過率の逆数の対数になりますね！

他の回答も見る

QSDS電気泳動について教えて下さい。

SDS電気泳動ってどういうものなのでしょうか？
検索してみるとタンパク質の変性を加えて用いるということは分かったのですが、
それ以外のことは分かりません。
どなたか詳しい方教えて下さい。　

Aベストアンサー

まず、SDS電気泳動（多くの場合はSDS-PAGE, SDS-polyacrylamide gel electrophoresisと言います）をやる目的ですが、タンパク質をサイズの違いで分離する方法です。例えば、細胞の中にはかなりの種類のタンパク質があるため、何かの方法で分離して検出する必要があります。SDS-PAGEでは、この分離を「タンパク質のサイズ（タンパク質の長さ）の違い」で行います。

SDS-PAGEの原理ですが、
１．タンパク質をSDSで変性させる（タンパク質の立体構造が壊れる）
２．電気泳動でタンパク質をポリアクリルアミドゲルの「網目」を通過させる（大きいサイズほど流れにくく、小さいサイズのタンパク質は流れやすい）
というものです。網目を通過しやすいかしにくいかでタンパク質の長さを測定します。結果として、ゲルの下の方には小さいタンパク質が、上の方には大きいタンパク質がきます。

SDSで変性させる理由ですが、タンパク質を直鎖状にすることです。タンパク質はその機能を発揮するために特有の立体構造（疎水結合やジスルフィド結合などを利用して）を形成します。タンパク質をそのまま泳動すると、ポリアクリルアミドゲルの「網目の通りやすさ」はタンパク質の長さだけに影響されず、タンパク質の形状（立体構造）にも影響を受けます。

SDS-PAGEを行う場合の多くは、タンパク質の長さだけを知りたいので、タンパク質の立体構造に影響される電気泳動は望ましくありません。そこで、SDSでタンパク質を直鎖状にして電気泳動します。

では、SDSをいれるとなぜ、タンパク質が直鎖状になるか、です。SDSは親水基と疎水基の両方をもつ化合物です。そして、その親水基は負（マイナス）に荷電しています。

タンパク質の立体構造はアミノ酸残基（アラニン、グリシン、リジン、トリプトファン・・・）の性質（特にアミノ酸残基がもつ電荷）の影響を大きく受けます。SDSがタンパク質に作用すると、SDSの疎水基側がタンパク質に親水基側が溶媒側に結合します。このタンパク質に結合したSDSの親水基（マイナスに荷電）がタンパク質を構成する様々なアミノ酸の特性を打ち消してしまいます。結果として、SDSが結合したタンパク質はアミノ酸残基の影響をうけられなくなり直鎖状になります。

また、このようにSDSが結合したタンパク質はマイナスに荷電しますので、電気泳動をするとタンパク質（とSDSの複合体）はマイナスからプラスの方へ泳動されていきます。

最後に、立体構造に大きな影響を与えるジスルフィド結合に関してです。このジスルフィド結合はSDSによって壊されません。そこで、多くのSDS-PAGEを行う場合は、SDSと共に2-mercaptoethanolやDTTといったジスルフィド結合を壊す還元剤で処理したタンパク質を電気泳動します。

なお、立体構造も含めて解析したい場合は、Native PAGEと呼ばれる方法で電気泳動を行います。